Методические рекомендации по лечению энтеровирусной инфекции

Содержание

Справка

Методические указания
МУ 3.1.1.2130-06
“Энтеровирусные заболевания: клиника, лабораторная диагностика, эпидемиология, профилактика”
(утв. и введены в действие Главным государственным санитарным врачом РФ 9 сентября 2006 г.)

Введены впервые

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов учреждений здравоохранения и Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

1.2. Полиомиелит, являющийся энтеровирусной инфекцией, в настоящих методических указаниях не рассматривается, поскольку мероприятия по его профилактике ведутся по специальной программе, для которой разработаны и используются соответствующие методические документы.

1.3. Указания содержат основные требования к комплексу организационных, диагностических, лечебно-профилактических, санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, своевременное и полное проведение которых ограничивает распространение энтеровирусных инфекций.

2. Клиника неполиомиелитных энтеровирусных заболеваний

Около 85% случаев энтеровирусных инфекций протекает бессимптомно. Около 12-14% случаев диагностируются как легкие лихорадочные заболевания и около 1-3% — имеют тяжелое течение, особенно у детей раннего возраста и лиц с нарушениями иммунной системы.

 Энтеровирусы способны поражать многие ткани и органы человека (центральная нервная система, сердце, легкие, печень, почки и др.) и это определяет значительный клинический полиморфизм вызываемых ими заболеваний. Особенностью энтеровирусных инфекций является то, что сходные клинические проявления болезни этиологически могут быть связаны с различными серотипами энтеровирусов; вместе с тем, представители одного и того же серотипа могут вызывать различные клинические формы заболевания. Лишь для некоторых серотипов энтеровирусов характерен определенный, строго очерченный комплекс клинических симптомов, который присущ именно этим возбудителям и не наблюдается при инфицировании другими серотипами. К настоящему времени известно, что только энтеровирус типа 70 и вариант вируса Коксаки А24 способны вызывать у людей эпидемические вспышки острого геморрагического конъюнктивита. Известно также, что только особо вирулентные варианты вирусов ЕСНО19 и ЕСНО11 были причиной вспышек острого энтеровирусного увеита у детей раннего возраста.

2.1. Серозный (асептический) менингит и другие формы энтеровирусных заболеваний центральной нервной системы

Подобно вирусу полиомиелита, неполиомиелитные энтеровирусы могут поражать центральную нервную систему (ЦНС). Наиболее частым проявлением энтеровирусного поражения ЦНС является серозный (асептический) менингит. Термин «серозный менингит» подразумевает клинический синдром воспаления менингеальных оболочек, связанный с вирусными инфекциями. Вирус-возбудитель может быть выделен из спинномозговой жидкости (СМЖ) пациентов. В отличие от гнойного менингита, при заболевании асептическим серозным менингитом бактериальные агенты в СМЖ больных обычно не обнаруживаются. В общей структуре инфекционных менингитов подавляющее число случаев составляют менингиты вирусного происхождения. Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволило значительно усовершенствовать диагностику вирусных менингитов. Как показали исследования последних лет, наиболее частыми возбудителями асептического менингита являются энтеровирусы. В США, где этиологическая диагностика энтеровирусных заболеваний вошла в широкую практику, ежегодно регистрируют около 75000 случаев менингита, вызываемого неполиомиелитными энтеровирусами. Энтеровирусные серозные менингиты составляют 85-90% от общего числа случаев менингитов вирусной этиологии. Из других вирусных патогенов к возбудителям асептического менингита относятся вирусы паротита и лимфоцитарного хориоменингита.

Серозный менингит является наиболее распространенной формой энтеровирусного поражения ЦНС. Оно часто не ограничивается воспалением менингеальных оболочек. Процесс может параллельно (или преимущественно) затрагивать и собственно вещество (паренхиму) головного мозга и спинной мозг. В этом случае, в зависимости от преобладания тех или иных симптомов, поражение ЦНС классифицируют как менингоэнцефалит, энцефалит, ромбэнцефалит, энцефаломиелит, полиомиелит, миелит, радикуломиелит.

Таблица 1.

Клинические синдромы, наблюдающиеся при энтеровирусных инфекциях

Инкубационный период при энтеровирусных серозных менингитах составляет в среднем около 1 недели. Чаще болеют городские жители, преимущественно дети до 7 лет, посещающие детские дошкольные учреждения. Менингеальный синдром протекает обычно доброкачественно с улучшением в течение нескольких дней. Смертельные исходы редки.

Серозный менингит сопровождается лихорадкой, головными болями, фотофобией и менингеальными симптомами.

Клиническая картина энтеровирусного менингита в значительной степени зависит от возраста пациентов. Новорожденные дети и дети раннего возраста (до 2-3 месяцев) входят в особую группу риска. Энтеровирусное поражение ЦНС в указанном возрасте обычно является частью тяжелого системного заболевания. При этом серозный менингит и/или менингоэнцефалит может быть диагносцирован у 27 — 62% детей с энтеровирусной инфекцией. В случае прогрессирующего развития системных проявлений инфекции, таких как некроз печени, миокардит, некротизирующий энтероколит, внутрисосудистая коагуляция, заболевание напоминает бактериальный сепсис. Наблюдаемый у части детей летальный исход связан при этом не с поражением ЦНС, а является результатом острой печеночной недостаточности (вирусы ЕСНО) или миокардита (вирусы Коксаки).

Неврологические симптомы, связанные с воспалением менингеальных оболочек у детей раннего возраста, включают ригидность затылочных мышц и выбухание родничка. Симптомы могут носить стертый характер. Развитию серозного менингита часто сопутствуют такие признаки болезни, как повышение температуры, беспокойство, плохой сон, высыпания на кожных покровах, ринит, диаррея. В случае легкого течения энтеровирусной инфекции менингеальный синдром у детей протекает доброкачественно и, как правило, быстро, в течение 7 — 10 дней, заканчивается полным выздоровлением без остаточных явлений. Благотворное воздействие на течение серозного менингита оказывает спинальная пункция, ведущая к снижению внутримозгового давления и способствующая быстрому улучшению состояния ребенка.

При спинальной пункции больных серозным менингитом спинномозговая жидкость (СМЖ) прозрачная, вытекает струей или частыми каплями и содержит увеличенное количество клеток — от 6 до 200 и более в 1 мкл. В первые 1-2 дня болезни СМЖ может быть нормальной, т.к. последствия воспалительных изменений в ней отстают от клиники. В дальнейшем число клеток в СМЖ быстро нарастает, причем, вначале могут обнаруживаться нейтрофильные лейкоциты (5-6 день болезни), а позднее преобладают лимфоциты. Наличие нейтрофилов в начале болезни может привести к ошибочному диагнозу «гнойный менингит». Белок в СМЖ остается нормальным или слегка повышается. Нормализация СМЖ происходит через 2-3 недели. У детей более старшего возраста и у взрослых лиц заболевание энтеровирусным менингитом начинается остро, с внезапного повышения температуры до 38 — 40.С. Вслед за этим наблюдается развитие ригидности затылочных мышц, головные боли, светобоязнь. У части пациентов отмечены рвота, потеря аппетита, диаррея, сыпь, фарингит, миалгии. Болезнь длится обычно менее одной недели. Многие пациенты чувствуют себя значительно лучше вскоре после люмбальной пункции. Прогноз у детей и взрослых, перенесших энтеровирусный менингит, как правило, благоприятный. Есть, однако, указания, что отдельные дети, переболевшие энтеровирусным менингитом, страдают нарушениями речи и имеют трудности в школьном обучении. У взрослых лиц в течение нескольких недель после перенесенной инфекции могут сохраняться головные боли.

Выделение энтеровирусов из СМЖ считается важным доказательством энтеровирусной этиологии заболевания. В некоторых случаях энтеровирус из СМЖ выделить не удается. Это может быть связано с тем, что возбудитель плохо размножается в культуре клеток или на новорожденных мышах, или с присутствием антител в СМЖ. При использовании для лабораторной диагностики метода обратной транскрипции — полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) последовательности генома энтеровируса можно обнаружить в значительном числе тех проб СМЖ от больных асептическим менингитом, из которых вирус не мог быть выделен в культуре клеток или на животных (в одной из эпидемий, вызванных вирусом ЕСНО 30, последовательности генома вируса были обнаружены в 42 из 50 проб СМЖ, из которых вирус не удалось выделить в культурах клеток).

Выписку из больницы лиц, переболевших серозным менингитом или другими формами поражения нервной системы, следует проводить не ранее двух недель от начала болезни (при условии нормализации показателей СМЖ) с последующим щадящим режимом на такой же срок.

При менингоэнцефалите и энцефалите энтеровирусной этиологии в процесс вовлекаются не только менингеальные оболочки, но и вещество головного мозга. Энтеровирусный энцефалит чаще всего носит распространенный характер (воспаление затрагивает всю паренхиму мозга), отличается тяжелым течением и высокой летальностью. Заболевание обычно начинается как серозный менингит с повышения температуры, назофарингита, миалгий. Далее у больных наблюдают слабость, сонливость и/или возбудимость. Появляются симптомы повышения внутримозгового давления, в ряде случаев отмечены помутнение диска зрительного нерва, многоочаговая энцефаломиелопатия, расстройства координации движений, нарушение функций черепномозговых нервов, остановка дыхания. Часто поражаются ядра, расположенные на дне IV желудочка (ромбэнцефалит). Развивается тяжелый бульбарный синдром с нарушением глотания, фонации и поражением центра дыхания. Болезнь может прогрессировать до стадии комы, потери сознания и/или генерализованных припадков. В случае распространения воспалительных явлений на спинной мозг инфекция ЦНС характеризуется как энцефаломиелит; у больных развиваются симптомы полиомиелитоподобного заболевания, парезы и параличи.

Поперечный миелит — тяжелое поражение спинного мозга — также может быть следствием энтеровирусной инфекции. Заболевание проявляется в виде спастических парезов и параличей верхних (реже) и нижних (чаще) конечностей с дисфункцией тазовых органов (задержкой или недержанием мочи и стула).

Этиологической причиной энтеровирусных нейроинфекций могут быть многие из известных серотипов энтеровирусов человека (табл. 1).

Возбудителями энтеровирусного менингита в России, странах Европы, США и Японии в последние 10 — 20 лет наиболее часто были вирусы ЕСНО 30, ЕСНО 11.

На протяжении 70 — 90-х годов большое внимание привлек энтеровирус 71 — новый серотип рода энтеровирусов. Энтеровирус 71 вызвал вспышки нейроинфекции в США, Австралии, Швеции, Японии (1969 — 1973), Болгарии (1975), Венгрии (1976), Малайзии (1997), Тайване (1998), Сингапуре (1999). Заболевания ЦНС во всех указанных странах, за исключением Болгарии, происходили на фоне вспышек (иногда достигавших размеров «национальных» эпидемий) ящуроподобного заболевания (высыпания на кожных покровах рук, ног и слизистой рта) и герпангины. Преобладающим симптомом поражения ЦНС был серозный менингит, который, как правило, имел доброкачественное течение. В Болгарии параллельно с серозным менингитом (545 случаев) было выявлено 149 случаев паралитического заболевания (полиомиелит, менингоэнцефалит, менингоэнцефаломиелит) с летальным исходом у 44 детей. В Венгрии зарегистрировано 826 случаев асептического менингита и 724 случая энцефалита (47 летальных случаев).

Вспышки заболеваний, вызванные энтеровирусом 71 в странах Юго-Восточной Азии (Малайзия, Тайвань) в конце 90-х годов, имели некоторые особенности. Наряду с известными для энтеровирусов проявлениями заболевания ЦНС, такими как серозный менингит, энцефалит, острые вялые параличи, у значительной части детей наблюдали поражение ядер IV желудочка (ромбэнцефалит) и поражение ствола мозга. Кроме того, во время азиатских вспышек впервые был отмечен тяжелый синдром острого отека легких в сочетании с геморрагиями. В целом, стволовой энцефалит и острый отек легких были двумя главными причинами летальных исходов заболевания у детей.

Вирус Коксаки А7 был первым из числа неполиомиелитных энтеровирусов, который уже в 50-е годы стал известен как возбудитель полиомиелитоподобного паралитического заболевания. В 1952 — 1968 гг. вирус Коксаки А7 вызвал вспышки полиомиелитоподобной инфекции среди детского населения в Казахстане, Шотландии, Швеции, Швейцарии. Заболевание могло проявляться в виде любой клинической формы полиомиелита, включая спинальную, бульбоспинальную, понтинную формы (с восстановлением, с остаточными явлениями или летальным исходом). В последнее время в литературе нет указаний о роли вируса Коксаки А7 в этиологии нейровирусных заболеваний.

Энтеровирус типа 70 — новый серотип рода энтеровирусов — в 70 — 80-х годах послужил причиной двухволновой пандемии острого геморрагического конъюнктивита (ОГК). Заболевание поразило миллионы людей, проживавших в приморских тропических и субтропических регионах Африки, Юго-Восточной Азии и Центральной Америки. ОГК заканчивался самоизлечением в течение 1-2 недель. У части пациентов (приблизительно у одного из тысячи), перенесших ОГК, наблюдали развитие тяжелого поражения ЦНС, которое клинически классифицировали как острый радикуломиелит. Неврологические проявления выражались в виде корешковых болей и острых вялых парезов и параличей конечностей (чаще нижних). Симптомы атрофии мышц, нередко приводившие к инвалидности, могли сохраняться месяцы и годы. Радикуломиелит было возможно дифференцировать от классического полиомиелита по следующим критериям:

— развитие радикуломиелита наблюдали у пациентов, имевших в анамнезе ОГК;

— в отличие от полиомиелита, поражавшего в обследованных регионах детей дошкольного возраста, радикуломиелит возникал у молодых взрослых людей (20 — 40 лет);

— при полиомиелите парезы и параличи затрагивают в основном дистальные мышцы конечностей, а при радикуломиелите — проксимальные мышцы;

— из материалов от больных полиомиелитом можно выделить полиовирус 1, 2 или 3 типов; у больных радикуломиелитом полиовирус обнаружить не удавалось, у отдельных пациентов с радикуломиелитом изолирован энтеровирус 70;

— у лиц, перенесших радикуломиелит, выявлено повышение уровня нейтрализующих антител к энтеровирусу 70 в сыворотке крови и в СМЖ.

 Остается неясным, какие факторы — эпидемиологические, генетические хозяина, генетические вируса, определяют патогенетические особенности определенного штамма вируса. Редко встречающиеся типы энтеровирусов могут вызывать внезапные эпидемии энтеровирусных инфекций, поскольку население оказывается неиммунным к этим типам вируса.

2.2. Респираторные заболевания, герпангина, вирусная экзантема полости рта и конечностей (ящуроподобный синдром)

Энтеровирусы являются одной из частых причин респираторных заболеваний. По данным Всемирной Организации Здравоохранения за 1967 — 1974 годы, респираторные заболевания составляли 15% от всех энтеровирусных инфекций и 21% от числа случаев энтеровирусных инфекций, о которых сообщил Центр по контролю за болезнями, США за 1970 — 1979 гг. Наиболее частыми являются респираторные заболевания верхних дыхательных путей. Они имеют короткий инкубационный период в 1-3 дня и протекают сравнительно легко. Пневмонии энтеровирусной этиологии относительно редки. Герпангина — лихорадочное заболевание с относительно острым началом и жалобами на лихорадку и боли в горле. Проявляется в виде характерных высыпаний на передних дужках неба, миндалинах, язычке, и задней стенке глотки. Болеют преимущественно лица молодого возраста. Заболевание протекает доброкачественно, заканчивается в течение нескольких дней, лишь в редких случаях осложняется менингитом.

При вирусной экзантеме полости рта и конечностей пузырьковые высыпания наблюдаются на руках и ногах, в полости рта и иногда на ягодицах.

 Причиной герпангины являлись вирусы Коксаки А и В, вирусы ЕСНО 6, 9, 11, 16, 17, 22, и 25 и энтеровируc типа 71. Главной причиной высыпаний на руках, ногах и во рту были вирусы Коксаки А10, А16 и энтеровирус типа 71.

2.3. Заболевания мышц, включая плевродинию

Этиологическая роль энтеровирусов в воспалительных заболеваниях мышц человека была распознана после выявления миотропизма вирусов Коксаки в экспериментах на новорожденных мышах. Способность энтеровирусов поражать мышечную систему человека впервые была установлена при эпидемии плевродинии на о. Борнхольм (борнхольмская болезнь). Плевродиния является острым лихорадочным заболеванием с миалгией, особенно в области грудной клетки и живота. Миалгия ограничивается мышечными болями, но без слабости мышц. Изредка наблюдаются рецидивы. Плевродиния встречается в различных регионах как в виде вспышек, так и в виде спорадических случаев. Вирусы Коксаки В3 и В5 являлись наиболее частой причиной заболевания.

Воспалительные заболевания мышц могут быть как острыми, так и хроническими. Острое воспалительное заболевание мышц обычно называют острым полимиозитом или острым миозитом. Оно характеризуется лихорадкой с миалгией, повышенным уровнем мышечных ферментов и, иногда, миоглобинурией. Хроническое воспалительное заболевание мышц является первичным заболеванием, которое классифицируют как полимиозит или дерматомиозит. Это заболевание протекает в диапазоне от подострого до прогрессирующей хронической слабости с отчетливой патологией, выявляющейся при биопсии мышц. Дерматомиозит отличается от миопатий наличием характерной сыпи.

Причины хронической воспалительной миопатии остаются недостаточно ясными. Данные серологических исследований не могут быть надежной основой для суждения об этиологии, так как сопутствующая энтеровирусная инфекция может совпадать по времени, но не иметь отношения к этиологии полимиозита. Результаты электронномикроскопических исследований могут неправильно интерпретироваться из-за сходства снимков вирионов с ультраструктурами рибосом и гликогена мышц. Энтеровирусы при хронических воспалительных миопатиях выделяются редко. Исследования на присутствие энтеровирусных геномных последовательностей в мышечной ткани дали противоречивую информацию. Результаты изучения Коксаки-вирусной инфекции на мышах говорят о возможности запуска энтеровирусами аутоиммунных воспалительных процессов с последующим исчезновением вируса.

Пациенты с иммунодефицитами могут страдать от дерматомиозито-подобного заболевания, протекающего синхронно с ЕСНО-вирусной инфекцией. Остается неясным, однако, что является первичным — поражение мышц вирусом, или иммунными реакциями в ответ на персистенцию вируса в организме.

2.4. Заболевания сердца

Термин «миокардит» обозначает воспаление миокарда, не связанное с ишемическими повреждениями сердца. Часто миокардит протекает субклинически без остаточных явлений. В некоторых случаях заболевание может иметь тяжелое течение и приводить к смертельному исходу. Считается, что 1,5% энтеровирусных инфекций, в том числе 3,2% инфекций, вызываемых вирусами Коксаки В, сопровождаются выраженными сердечными симптомами. Миокардит нередко находят на вскрытиях детей, умерших от молниеносной Коксаки-вирусной инфекции. Чаще всего заболевания сердца вызываются вирусом Коксаки В5, хотя и другие вирусы Коксаки В или А и вирусы ЕСНО также могут быть причиной этой болезни. Наиболее часто заболевают миокардитами, вызванными вирусами Коксаки В, лица между 20 и 39 годами, преимущественно мужчины. Выделение вируса или обнаружение антител у заболевших острым миокардитом следует оценивать с осторожностью, поскольку энтеровирусная инфекция может быть сопутствующим заболеванием, не имеющим непосредственного отношения к сердечной патологии.

У отдельных пациентов острое воспаление миокарда переходит в хронический миокардит, прогрессирующий до дилатационной кардиомиопатии. Дилатационная кардиомиопатия человека может быть как врожденной, так и результатом перенесенной ранее вирусной инфекции, в частности, вызванной вирусами Коксаки В. В этом случае сердце увеличено в размере, функция его существенно нарушена, но без признаков воспаления. Частота этого заболевания достигает в США 6 новых случаев на 100.000 населения ежегодно.

2.5. Заболевания новорожденных детей и детей младшего возраста

Новорожденные и дети младшего возраста представляют группу особого риска. У большинства из них энтеровирусная инфекция протекает бессимптомно. В некоторых случаях болезнь проявляется как относительно доброкачественная лихорадка, иногда с сыпью. В то же время неполиомиелитные энтеровирусы являются наиболее частой причиной асептического менингита у детей моложе месяца. Обычно имеется предшествующее лихорадочное или респираторное заболевание у матери до родов. Инфекция у матери может быть как бессимптомной, так и тяжелой.

Очень серьезным, часто с летальным исходом, является сепсис-подобное заболевание, вызываемое энтеровирусами. В одной серии наблюдений энтеровирусы были причиной септического заболевания у 65% детей в возрасте до 3 месяцев. В других наблюдениях энтеровирусный геном был обнаружен у 80 из 345 детей до 3 месяцев, госпитализированных с подозрением на сепсис. В ряде случаев инфекция протекает молниеносно, крайне тяжело и заканчивается смертью ребенка с некрозом печени и поражением легких, сердца, поджелудочной железы и мозга. Скорее всего, состояние здоровья ребенка, уровень материнских антител и вирулентность вируса определяют тяжесть заболевания. По-видимому, летом и осенью энтеровирусы являются более частой причиной сепсис-подобных заболеваний, чем бактерии.

Поражения плода, выкидыши и мертворождения обычно редки, им предшествует заболевание матери. Заражение новорожденных может происходить проникновением вируса через плаценту, а также во время родов содержащими вирус материнскими кровью, калом, вагинальными выделениями. Источником заражения может быть также вирус, выделяемый другими новорожденными и персоналом больницы. Поэтому очень важным является строгое соблюдение правил гигиены, препятствующих переносу инфекции внутри детских больниц (смена перчаток и масок персоналом, изоляция заболевших детей и др.).

2.6. Диабет

Предполагается, что генетическая предрасположенность и факторы окружающей среды могут иметь значение при возникновении инсулин-зависимого сахарного диабета. Ряд эпидемиологических и серологических исследований свидетельствует о связи между энтеровирусной инфекцией и развитием диабета. Антитела IgM к вирусу Коксаки В обнаруживали в три раза чаще в случаях первично дагностированного инсулин-зависимого сахарного диабета, чем у контрольных лиц. Имеются немногочисленные, но хорошо документированные случаи выделения вируса Коксаки В4 из поджелудочной железы пациентов с острым началом инсулин-зависимого сахарного диабета или погибших от него. При заражении некоторыми из выделенных вирусов обезьян и определенных линий мышей наблюдали развитие диабета. Пациенты, умершие от диабета, при котором выделяли вирус Коксаки, иногда имели и панкреатит, включая островковый. В целом, связь между энтеровирусной инфекцией и диабетом представляется весьма вероятной. Требуются, однако, дальнейшие исследования энтеровирусного диабета у людей и роли при его возникновении иммунных механизмов хозяина.

2.7. Заболевания глаз

Новый серотип энтеровирусов — тип 70 — впервые в мировой практике вызвал в 70 — 80-х годах ХХ столетия две мощные волны острого геморрагического конъюнктивита (ОГК). Первая волна ОГК началась в Гане и в течение 1969 — 1971 гг. быстро охватила десятки миллионов людей в прибрежных регионах Западной, Восточной и Северной Африки, Индии и в большинстве стран Юго-Восточной Азии, включая Японию. Небольшие локальные вспышки имели место в городах Европы (Москва, 1971; Лондон, 1971: Рим, 1974). Вторая волна пандемии ОГК возникла в 1980 г., когда были зарегистрированы вспышки острого заболевания глаз в Кении, Сингапуре, Малайзии. В первой половине 1981 г. обширные эпидемии ОГК отмечены в густонаселенных городах Индии, в Пакистане и Объединенных Арабских Эмиратах. Во второй половине 1981 г. пандемия впервые пересекла Атлантический океан и поразила сначала Бразилию, а затем население субтропических и тропических районов Южной, Центральной и Северной Америки. В 1982 г. вспышки ОГК были зарегистрированы в Австралии.

В 1970 — 1979 гг. в течение периодических вспышек ОГК в Сингапуре, Гонконге, Бомбее, Бангладеш, Малайзии возбудителем острого поражения глаз был вариант вируса Коксаки А24 (иногда перемежавшийся с энтеровирусом 70).

Острый геморрагический конъюнктивит (ОГК) характеризовался коротким инкубационным периодом, от 24 до 48 часов, предшествовавшим быстрому началу заболевания одного или обоих глаз. Основные симптомы болезни: слезотечение, жжение, боль со стороны пораженного глаза; отек и гиперемия конъюнктивы; субконъюнктивальные геморрагии от небольших петехий до обширных пятен; увеличение околоушных лимфоузлов. В ряде случаев отмечено развитие кератита и/или слабовыраженного переднего увеита. В целом все симптомы заболевания глаз, сопряженные с ОГК, заканчивались быстрым (в течение 1-2 недель) и полным самоизлечением без нарушения зрительных функций. По характеру клинических проявлений было невозможно определить какой из вирусов (энтеровирус 70 или вирус Коксаки А24) был этиологической причиной ОГК. Тяжелые неврологические осложнения (острый радикуломиелит), наблюдавшиеся у отдельных пациентов были ассоциированы только с конъюнктивитом, вызванным энтеровирусом 70.

ОГК поражал преимущественно молодых взрослых лиц (20 — 40 лет) и подростков. Источником инфекции были люди, больные ОГК, предметы быта (полотенца, подушки и др.), инструменты в кабинетах глазных врачей; способ передачи инфекции — воздушно-капельный, фекально-оральный, контактный — через слезную жидкость. Заболевание распространялось стремительно, и очень быстро (в течение нескольких дней) инфекция выводила из строя все трудоспособное население целых поселков и городов. На протяжении последних лет вспышки ОГК энтеровирусной этиологии не отмечены.

Новое заболевание глаз — острый энтеровирусный увеит (ЭУ), было обнаружено и изучено в нашей стране. Особо вирулентные варианты вирусов ЕСНО 19 и ЕСНО 11 вызвали в 1980 — 1989 гг. пять вспышек энтеровирусной инфекции, осложненной увеитом, в трех крупных городах Сибири (Красноярск и Красноярский край 1980 — 1981; 1982, 1986; Омск 1987 — 1988; Иркутск 1988 — 1989).

Заболевание глаз наблюдали преимущественно у детей в возрасте до 1 года. Заражение происходило чаще всего в стационарах, куда дети были помещены по поводу тяжелых предшествовавших заболеваний. Всего было выявлено около 750 случаев энтеровирусного увеита у детей.

Основными клиническими проявлениями острого энтеровирусного увеита были быстрая деструкция радужной оболочки (отек и гиперемия радужки, разрушение пигментного листка радужки) и деформация зрачка (поражение мышц сфинктера зрачка). Во многих случаях заболевание прогрессировало и вело к развитию ранних и поздних (через 7-10 лет) осложнений (катаракта, глаукома) со значительной или полной потерей зрения. Профилактическое введение гамма-глобулина и вакцинация живой полиовирусной вакциной детей до трех лет существенно ограничили размах четырех последних вспышек ЭУ.

Помимо городов Сибири, единичные и групповые случаи ЭУ (всего около 200 случаев) удалось ретроспективно выявить у детей в центральных, южных, западных регионах России и в ряде других стран СНГ (Армения, Азербайджан, Грузия, Украина). Ретроспективный диагноз «энтеровирусный увеит» ставили на основании результатов клинического, анамнестического и серологического обследования пациентов. Дети, перенесшие острый ЭУ, длительно (3 — 7 лет) сохраняли высокий уровень нейтрализующих антител в крови (до 1:500 — 1:2000) к одному из трех использованных в реакции нейтрализации эталонных сибирских офтальмотропных субсеротипов — ЕСНО19/К, ЕСНО11/А, ЕСНО11/В. В течение последних 15 лет в России не были зарегистрированы вспышки ЭУ.

2.8. Патогенез и патологическая анатомия

2.8.1. Патогенез

При энтеровирусной инфекции после определенного периода первичного размножения вируса (вероятнее всего, в лимфоидной ткани глотки и кишечника) может развиться вирусемия, которая ведет к дальнейшему размножению вируса в клетках ретикулоэндотелиальной системы и, наконец, в клетках поражаемых органов (мозг и спинной мозг, мягкие мозговые оболочки, печень, миокард, кожа, другие внутренние органы).

Вирус весьма эффективно заражает маленьких детей при попадании небольшой дозы пероральным путем и определяется в глотке в первые 3-4 дня (не более 7 дней) после заражения, как при клинически выраженной инфекции, так и в бессимптомных случаях. Вирус выделяется с фекалиями в течение 3-4 недель (не более 5 недель), а у иммунодефицитных лиц может выделяться в течение нескольких лет.

В кишечном тракте одновременно могут размножаться два или более типов энтеровирусов, но во многих случаях имеет место интерференция с преимущественным размножением одного из вирусов. Природа местного, или клеточного, иммунитета, выражающегося в защите кишечника против реинфекции после перенесенного заражения энтеровирусами, до сих пор достаточно не изучена.

2.8.2. Патологическая анатомия

Вирусы Коксаки группы В вызывают у новорожденных детей тяжелые генерализованные заболевания. Характерная патологическая картина включает очаговые некрозы, сопровождающиеся инфильтрацией лимфоцитами и полиморфноядерными лейкоцитами. Эти изменения наиболее значительны в сердце, но обнаруживаются также в головном и спинном мозге, печени, почках и надпочечниках. Вирусы Коксаки В могут поражать серое и белое вещество центральной нервной системы, вызывая картину менингоэнцефалита.

Инфекция энтеровирусами в перинатальном периоде и в первый год жизни иногда вызывает молниеносно протекающее сепсис-подобное заболевание со смертельным исходом. Характерными патогистологическими изменениями являются внутрисосудистая коагуляция и некроз печени.

При полиомиелитоподобных заболеваниях обнаруживают тяжелые поражения центральной нервной системы, преимущественно в передних рогах спинного мозга, центрах продолговатого мозга и редко — в передних отделах мозга.

При энтеровирусном увеите разрушаются пигментный слой радужки и цилиарного тела, мышца сфинктера зрачка. В поздние сроки (через 2 — 12 лет) наступает фиброз и атрофия радужки, зарастание эндотелием зоны оттока с развитием глаукомы.

2.9. Иммунология

Нейтрализующие антитела появляются уже на ранних этапах энтеровирусной инфекции, одновременно с появлением симптомов заболевания. Они обычно типоспецифичны и сохраняются в организме много лет (вероятно в течение всей жизни). Заражение одним типом может вести к появлению низкого уровня быстро исчезающих антител к другим типам энтеровирусов. Роль клеточного иммунитета при энтеровирусных инфекциях изучена недостаточно.

2.10. Лечение неполиомиелитных энтеровирусных заболеваний

В настоящее время нет зарегистрированных химиотерапевтических препаратов для лечения или профилактики энтеровирусных болезней. Специфические вакцины неактуальны из-за множества серотипов вирусов и особенностей их эпидемиологии.

Основным средством для лечения асептического менингита является дегидратирующая терапия — диакарб, лазикс, фуросемид. Как указывалось выше, определенное облегчение приносит больным люмбальная пункция. В тяжелых случаях менингоэнцефалита, кроме дегидратации, показано применение дексометазона внутривенно в возрастной дозе, в течение 2-3 дней. При нарушениях функции дыхания применяются аппараты искусственного дыхания. При внутривенном введении дезинтоксикационных препаратов предпочтительно введение полиглюкина, реополиглюкина, реомакродекса.

Лечение внутривенным введением гамма-глобулина оказалось успешным при энтеровирусных инфекциях ЦНС у иммунодефицитных больных. Эффективность такой терапии может зависеть, однако, от количества типоспецифических антител в препаратах гамма-глобулина.

Во время внутрибольничных вспышек энтеровирусного увеита в Сибирских городах для профилактики распространения инфекции внутри стационаров всем госпитализированным детям до 3-х лет вводили гамма-глобулин. С целью предотвращения распространения энтеровирусной инфекции за пределы стационаров все детское население (до 3 — 7 лет) неблагополучных городов было подвергнуто поголовной массовой иммунизации живой вакциной против полиомиелита. Предполагалось, что эта мера будет способствовать созданию у детей интерференционного барьера и подавлению размножения энтеровирусов, вызывающих увеит. В целом, выполненные мероприятия оказались весьма эффективными и позволили снизить в отдельных стационарах число заболевших увеитом детей до единичных случаев.

Внутрибольничные заражения энтеровирусами являются повседневной и очень существенной частью всей перинатальной и детской патологии, и это представляется одной из важных проблем современной медицины в целом. Необходимо выявить все возможные пути внутрибольничного инфицирования и разработать меры профилактики, начиная от планировки помещений до соблюдения больными и персоналом строгих правил поведения направленных на предотвращение распространения вируса.

3. Лабораторная диагностика неполиомиелитных энтеровирусных инфекций

В данном разделе изложены основные сведения по специфической лабораторной диагностике энтеровирусных инфекций. Много полезных сведений об основах специфической диагностики энтеровирусных инфекций можно получить дополнительно в изданных ранее справочных руководствах, например, в главе: «Энтеровирусы» в книге «Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных болезней» (под редакцией Э. Леннета и Н. Шмидт, Москва, «Медицина», 1974 г. с. 421 — 479), в «Руководстве по вирусологическим исследованиям полиомиелита», изданном ВОЗ на русском языке в 2005 году, а также в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита», изданными ВОЗ на русском языке в 2005 году.

3.1. Характеристика энтеровирусов

3.1.1. Классификация

Первоначально энтеровирусы были выделены в самостоятельную группу на основании физико-химических характеристик, таких как плавучая плотность (1,31 — 1,35 г/см3 в хлористом цезии), коэффициент седиментации (от 150S до 165S), вес вириона (от 8 х 10(6) до 9 х 10(6) Dа), отсутствие липидной оболочки, устойчивость к обработке эфиром и стабильность при рН от 3 до 10. Разделение энтеровирусов человека на четыре больших группы (вирусы полиомиелита, Коксаки А, Коксаки В, ЕСНО) было основано на их патогенности для лабораторных животных или способности вызывать цитопатический эффект в культуре клеток приматов (Табл. 2). Идентификация серотипа основывалась на нейтрализации инфекционности вируса для животных или цитопатического действия вируса в культуре клеток специфическими антисыворотками (Табл. 3).

Согласно последней классификации вирусов (Международный комитет по таксономии вирусов, 2003 г.), основанной на геномных характеристиках вирусов, неполиомиелитные энтеровирусы человека представлены 4 видами (A, B, C, D), входящими в род Enterovirus, который относится к семейству Picornaviridae (от pico — малый и rna — содержащий РНК) (Табл. 4). К каждому из 4 видов отнесены различные серотипы неполиомиелитных энтеровирусов. (Табл. 5). Типовым представителем рода является вирус полиомиелита.

Таблица 2.

Энтеровирусы человека: восприимчивые животные и культуры клеток

Примечание: Имеется много штаммов энтеровирусов, которые имеют  характеристики, свойственные одновременно разным  группам энтеровирусов.

Таблица 3.

Неполиомиелитные энтеровирусы человека
(принятая ранее классификация)

Примечания:

1. Не менее 20 серотипов энтеровирусов человека еще не классифицировано.

2. Вирус Коксаки А 23 идентичен ранее описанному вирусу ЕСНО 9.

3. Вирус ЕСНО 8 идентичен ранее охарактеризованному вирусу ЕСНО 1.

4. Вирус ЕСНО 10 оказался реовирусом.

5. Вирусы ЕСНО 22 и ЕСНО 23 были выделены как род Parechovirus и его отдельные серотипы.

6. Вирус ЕСНО 28 оказался риновирусом.

7. Вирус ЕСНО 34 идентичен ранее охарактеризованному вирусу Коксаки А 24.

8. Энтеровирус 72 является возбудителем гепатита А и выделен в отдельный род Hepatovirus в семействе Picornaviridae (смотрите таблицу 4).

Таблица 4.

Семейство Picornaviridae, роды, виды и число входящих в виды серотипов

Примечание: Приведенная в таблице классификация основана на геномных характеристиках вирусов. По-видимому, будут считаться отдельными родами еще несколько энтеровирусов животных. Большое число энтеровирусов (не менее 20) еще не классифицировано.

Таблица 5.

Таксономические виды неполиомиелитных энтеровирусов человека и входящие в виды серотипы

В настоящее время определена полностью или частично нуклеотидная последовательность геномов многих энтеровирусов. Все энтеровирусы оказались сходными по общей схеме организации геномов, хотя и имеют различия по видам и серотипам.

3.1.2. Влияние химических и физических агентов

Энтеровирусы вне организма нечувствительны к воздействию всех известных антибиотиков и химиотерапевтических препаратов. Эфир, дезоксихолат и различные детергенты, разрушающие арбовирусы, миксовирусы и ряд других вирусов, не оказывают влияния на энтеровирусы. Энтеровирусы устойчивы в кислой среде (рН 3 — 5). Обработка 0,3% формальдегидом, 0,1 N HCl или свободным остаточным хлором в концентрации 0,3 — 0,5 мг/л ведет к быстрой инактивации энтеровирусов, однако присутствие органических веществ может оказывать защитное действие.

При 50.С энтеровирусы быстро разрушаются. Добавление к вирусной взвеси хлористого магния в одномолярной концентрации сохраняет титр вируса при 50.С практически неизменным в течение часа.

В замороженном состоянии активность энтеровирусов сохраняется в течение многих лет, при хранении в обычном холодильнике (+4. — +6.С) — в течение нескольких недель, а при комнатной температуре — на протяжении нескольких дней.

Энтеровирусы быстро разрушаются под воздействием ультрафиолетового облучения или при высушивании. Они выдерживают многократное замораживание и оттаивание без потери активности.

3.2. Роль лабораторных вирусологических исследований в постановке диагноза энтеровирусной инфекции

Для бесспорного признания вируса этиологическим агентом в обследуемом случае заболевания не всегда достаточно выделить вирус и продемонстрировать появление специфических антител. Особенно это касается этиологии спорадических случаев или первых случаев во время вспышек заболеваний, этиология которых на первых порах была неясной. Интерпретация лабораторных данных в указанных случаях требует особенной осторожности.

Для признания определенного вируса этиологическим фактором заболевания сбор и анализ доказательств должны быть многосторонними.

Клиническая картина изучаемого заболевания с неясной этиологией должна быть очерчена по физическим, лабораторным, патолого-анатомическим данным.

Должны быть изучены эпидемиологические характеристики заболевания (источник инфекции, пути передачи, возраст заболевших, социальные, географические условия, сезонность и т.п.) в пользу его своеобразия.

Должны быть представлены данные в пользу вирусной этиологии болезни (т.е., данные, исключающие роль других микроорганизмов и неинфекционных причин).

От больного должен быть выделен предполагаемый вирусный агент или выявлены его нуклеотидные последовательности, а также установлена его таксономическая принадлежность.

Следует показать, что вирус не случайно присутствовал в организме пациента и не является контаминантом, полученным от использованных для выделения вируса животных или культур клеток.

Должны быть показаны сероконверсия или другие признаки иммунитета после перенесенного заболевания.

Заболевание должно быть воспроизведено при введении выделенного агента животным и изучены характеристики вызванного заболевания.

Вакцина или иммунная сыворотка должны предохранять от заболевания. Следует учитывать влияние на болезнь и других воздействий (например, интерференции с вакцинным вирусом полиомиелита у детей с энтеровирусной инфекцией).

Желательно, чтобы результаты этиологического изучения болезни были подтверждены другими исследователями.

Энтеровирусы очень часто вызывают бессимптомную инфекцию; доказаны случаи одновременной инфекции двумя, тремя и даже четырьмя энтеровирусами. Некоторые энтеровирусы (полиомиелита, Коксаки А7, А9, А16, А21 и другие, вирусы ЕСНО типов 4, 6, 9, 11, 16, 19, 30 и другие, энтеровирус типа 71) обнаруживаются периодически в качестве этиологических агентов эпидемических вспышек и их патогенность для человека хорошо доказана. Однако эти же энтеровирусы часто выделяют от здоровых людей или на фоне очень легкого недомогания. Поэтому простое выделение вируса еще не является безоговорочным доказательством этиологической роли этого агента при заболевании и может быть случайным совпадением. Выделение энтеровируса из пищеварительного тракта даже при 4-кратном нарастании титра антител к этому вирусу может не иметь отношения к этиологии обследуемого случая заболевания. Вместе с тем, регулярное выделение энтеровируса одного типа от сходных случаев заболеваний и от клинически здоровых лиц из окружения больных в совокупности с гомотипичной иммунологической реакцией является веским доказательством этиологической роли соответствующего агента.

Выделение предполагаемого энтеровируса из стерильных жидкостей организма (СМЖ, крови и других) или из тканей (центральной нервной системы, сердечной мышцы и других), обнаружение характерных патолого-анатомических признаков, обнаружение вирусного антигена (или геномных последовательностей вируса) в пораженных клетках рассматривают как убедительные доказательства этиологической связи выявленного агента с обследуемым заболеванием. Выделение одного и того же типа вируса от больных со сходными клиническими симптомами во время вспышки, особенно если оно подкрепляется результатами серологических исследований, указывает на этиологическую роль вируса этого типа. Для признания этиологической роли энтеровируса при изучении вновь возникающих заболеваний (например, вируса Коксаки А7 и энтеровируса типа 71 при вспышках полиомиелитоподобного заболевания, вирусов ЕСНО19 и ЕСНО11 при вспышках острого энтеровирусного увеита) помимо комплекса данных, полученных в одной лаборатории, чрезвычайно ценным является получение сходных эпидемиологических и лабораторных данных в других лабораториях, в других районах, и в другие годы.

3.3. Методы лабораторной вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций

3.3.1. Безопасность работы в лаборатории, выполняющей диагностические исследования энтеровирусных инфекций

Согласно Российским официальным документам, неполиомиелитные энтеровирусы отнесены к IV группе патогенности («Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности». СП 1.2.036-95). Правила устройства микробиологических лабораторий, получения разрешений на работу с микроорганизмами и безопасности работы регламентируются СП 1.2.006-93 и СП 1.2.731-99.

Выполнение диагностических исследований энтеровирусных инфекций допускается в лабораториях, организациях, структурных подразделениях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение и лицензию на выполнение работ с микроорганизмами III-IV групп патогенности.

Организация работы в лаборатории выполняется в соответствии с СП 1.2.731-99. «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами».

Клинические материалы, которые используются для диагностических исследований энтеровирусных инфекций, могут быть инфицированы диким полиовирусом, поэтому при работе с ними необходимо соблюдать правила, изложенные в следующих нормативных документах:

— СП 1.2.036-95. «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования материалов, инфицированных или потенциально инфицированных диким полиовирусом»;

— СП 1.3.1325-03. «Безопасность работы с материалами, инфицированными или потенциально инфицированными диким полиовирусом».

Основные рекомендации по работе лабораторий, выполняющих диагностические исследования энтеровирусных инфекций, содержатся в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита». 4-е издание, ВОЗ, Женева, 2005 г. и в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита». ВОЗ, Женева, 2005 г.

Среди лиц, работающих с энтеровирусами, точно документированные случаи лабораторных заражений являются редкими. Это — или следствие несчастного случая, или несоблюдение соответствующих предосторожностей. Известен случай заноса дикого вируса полиомиелита в семью работником производства полиовирусной вакцины. Хорошее владение техникой работы и употребление различных защитных приспособлений значительно снижают этот риск. Наиболее частой причиной лабораторных заражений является вдыхание аэрозолей вируссодержащих материалов, образующихся при работе с пипетками, шприцами, при центрифугировании, а также контакт с зараженными животными.

Работников, осуществляющих работу с инфекционными материалами, нужно инструктировать о необходимости обращения к врачу в случае заболевания лихорадочного типа. Следует периодически брать пробы крови у персонала и хранить сыворотки в замороженном виде для серологических исследований в случае заболевания. Для каждой лаборатории в соответствии с конкретными условиями работы следует разработать руководство по технике безопасности. Основное внимание следует уделять необходимости сознательного и ответственного отношения к работе со стороны персонала, а также тщательному обучению правилам безопасности новых сотрудников, поскольку само по себе существование правил безопасности и защитных приспособлений еще не обеспечивает предупреждения лабораторных заражений.

Санитарными Правилами СП 1.2.731-99 “Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами”, определяются требования к организации работы, включая требования к помещениям и оборудованию лабораторий, к проведению работ в лаборатории, к средствам индивидуальной защиты, к содержанию животных, к обеззараживанию материала и уборке помещений, к мероприятиям по ликвидации аварий и к организации контроля за выполнением требований биологической безопасности. В этих Санитарных Правилах предписаны режимы обеззараживания различных зараженных материалов (поверхностей рабочих столов, стен и полов помещений, защитной одежды, лабораторной посуды и вируссодержащих материалов, инструментов). В этих правилах предписываются также режимы дезинфекции предметов, которые могут быть контаминированы выделениями больных людей (одежда, обувь, белье, посуда, жидкие отходы, выделения больного, посуда из-под выделений, санитарно-техническое оборудование, уборочный материал, мусор, транспорт). Рекомендуются также средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности и бактериологический метод контроля эффективности работы парового стерилизатора.

3.3.2. Правила забора и транспортирования материалов от больных для проведения вирусологических исследований

Для подтверждения вирусной этиологии заболевания необходимо проведение лабораторного исследования, эффективность которого зависит от правильного сбора соответствующих материалов (тканей, фекалий, носоглоточных смывов, крови, везикулярной жидкости, спинномозговой жидкости) и транспортирования их в лабораторию. Все пробы для выделения вируса необходимо брать с соблюдением соответствующих предосторожностей для исключения контаминации одной пробы материалом другой пробы этого же больного или материалом пробы другого обследуемого. Для успешного лабораторного исследования необходимо производить как можно более ранний отбор проб.

Забор материалов осуществляется медицинскими работниками лечебно-профилактического учреждения, куда госпитализирован больной. Для отбора проб используют стерильную стеклянную или пластиковую посуду.

Две пробы фекалий и для выделения вируса отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней, с интервалом 24 — 48 часов.

Носоглоточные/глоточные смывы отбирают в первые 3-4 дня от начала заболевания. Для получения носоглоточного/глоточного смыва можно использовать стерильную дистиллированную воду, бульон или солевой раствор. Отбор материала с помощью глоточного тампона производят в те же сроки. Тампоном протирают заднюю стенку глотки, миндалин и небных дужек. Тампоны помещают в пробирку с 1-2 мл раствора Хэнкса; пробу исследуют сразу или хранят в замороженном виде.

Спинномозговую жидкость берут в первые дни болезни в асептических условиях стерильным шприцом только по клиническим показаниям.

Пробы крови для серологической диагностики следует брать утром натощак. На всех этапах взятия и обработки крови принимают меры для предотвращения гемолиза. Первую пробу крови (5 мл) берут как можно раньше после начала болезни, вторую — на 3-4-й неделе, в стадии реконвалесценции. Параллельно кровь исследуют на выделение вируса — возбудителя болезни.

В случае летального исхода для исследования забирают секционные материалы — ткани головного, спинного и продолговатого мозга и варолиева моста, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки. При необходимости исследованию подвергают и другие материалы — ткань сердечной мышцы, печени, легких, селезенки, почек, лимфатических узлов, глаза и т.д. Пробу нужно брать как можно раньше после смерти. Ткани берут в заранее намеченном порядке, чтобы избежать их контаминации содержимым желудка и кишечника. Для иссечения тканей пользуются стерильными инструментами (отдельный набор для каждой пробы). Объем каждой пробы (кусочка) из тканей центральной нервной системы должен составлять примерно 1 см3; из толстой кишки иссекается сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы.

Собранные пробы немедленно отправляют в лабораторию. Все пробы, кроме фекалий, спинномозговой жидкости и крови сразу же после взятия помещают в транспортировочную среду. Если отправка проб задерживается, их помещают в холодильник при температуре +4. — +8.С. Если время до отправки превышает 24 часа пробы замораживают при температуре -20о или ниже. Следует сохранять их замороженными до получения и обработки в лаборатории. Сыворотки без добавления консервантов хранят в замороженном виде. Повторное замораживание и оттаивание сывороток (больше 4 раз) может оказывать неблагоприятное влияние на титр антител.

Пробы помещают в пластиковые мешки так, чтобы избежать протечек и повреждений. Все материалы должны сопровождаться соответствующими документами — направлением на исследование с указанием наименования учреждения, адреса, телефона, адреса электронной почты, факса и сопроводительными документами, содержащими основные сведения о больном.

Транспортировку проб осуществляют с соблюдением условий «холодовой цепи» в термоконтейнерах или термосах, обеспечивающих эти условия. При транспортировке проб руководствуются санитарными правилами «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности. СП 1.2.036-95».

При отборе, хранении и транспортировке проб руководствуются основными методическими документами:

«Рекомендации по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита». ВОЗ, Женева, 2005 г., «Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита». 4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005 г.

3.3.3. Выделение энтеровирусов

Двумя основными методами лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции являются выделение вируса (в культуре клеток или на животных) и обнаружение РНК энтеровирусов с помощью ПЦР. Выделение вируса, хотя и требует большего времени, дает наиболее однозначный ответ на вопрос об этиологии заболевания и позволяет использовать выделенный вирус для последующих эпидемиологических исследований. ПЦР обладает большей чувствительностью, большей быстротой и позволяет выявлять вирусы, не размножающиеся в культуре клеток. ПЦР используют при исследовании спинномозговой жидкости и материалов из верхних дыхательных путей.

3.3.3.1. Культуры клеток

Универсальной культуры клеток (или культуральной системы), пригодной для выделения всех энтеровирусов, не существует. Некоторые штаммы энтеровирусов не обладают цитопатогенностью ни для одной из известных культур клеток и могут быть выделены только с использованием чувствительных лабораторных животных, что достаточно сложно в условиях практической лаборатории. Обобщенные сведения о чувствительности наиболее распространенных в лабораториях перевиваемых культур клеток к различным энтеровирусам представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Чувствительность перевиваемых культур клеток к различным энтеровирусам

Для увеличения вероятности выделения энтеровируса из исследуемого материала целесообразно использовать не менее двух видов культур клеток, одной из которых должна быть культура клеток RD.

Эффективность исследования материала зависит от состояния клеточных культур: клетки должны сохранять высокую чувствительность к энтеровирусам, аутентичность, стабильность и быть свободными от загрязнения микроорганизмами (простейшими, бактериями, грибами, дрожжами, микоплазмами, вирусами).

Культуры клеток должны быть получены из аттестованного официального источника. Подробные рекомендации по работе с культурами клеток изложены в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита. 4-е издание. ВОЗ. Женева, 2005 г.».

3.3.3.2. Подготовка проб для исследования в культуре клеток

Пробы фекалий. Готовят 10 — 20% суспензию фекалий в сбалансированном солевом растворе (ФСБ) с антибиотиками. Пробы обрабатывают хлороформом, к действию которого устойчивы энтеровирусы. Такая обработка позволяет избавиться от бактериального и грибкового загрязнения пробы, удаляет потенциально токсичные липиды, способствует диссоциации вирусных агрегатов.

В маркированную центрифужную пробирку последовательно добавляют 10 мл ФСБ с антибиотиками, 1 г стеклянных бус и 1 мл хлороформа. Вносят примерно 2 г фекальной пробы, плотно закрывают пробирку и интенсивно встряхивают в течение 20 минут. Центрифугируют в центрифуге с охлаждением в течение 20 минут при 1500 g. Надосадочную жидкость отбирают для исследования. (Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита. 4-е издание. ВОЗ. Женева, 2005 г.).

Тампоны. Тампоны встряхивают в транспортировочной среде, для высвобождения клеточного материала, избегая образования аэрозолей. Полученную суспензию обрабатывают хлороформом, как описано выше.

Спинномозговая жидкость. Пробы спинномозговой жидкости используют для исследования без дополнительной обработки. Если проба мутная, ее осветляют центрифугированием при 1600-2000 g в течение 10 минут.

Тканевые пробы. Готовят 10 — 20% тканевую суспензию. Для этого ткани растирают в стерильной ступке, добавляя при необходимости стерильный песок и небольшое количество транспортировочной среды. Суспензию осветляют центрифугированием при 1600 — 2000 g в течение 10 минут.

3.3.3.3. Выделение и идентификация вирусов на культуре клеток

При выделении энтеровирусов с помощью чувствительных культур клеток следует руководствоваться принципами, изложенными в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита». ВОЗ, Женева, 2005 г., «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита». 4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005 г., Методических указаниях 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов», Москва, 2006.

Энтеровирусы обычно идентифицируют в реакциях нейтрализации инфекционности, связывания комплемента, преципитации, иммунофлюоресценции или подавления гемагглютинации. Проведение всех этих реакций возможно лишь при наличии диагностических типоспецифических иммунных сывороток высокого титра. Наиболее чувствительным, специфичным и распространенным способом идентификации является реакция нейтрализации инфекционности.

В основе реакции нейтрализации инфекционности лежит взаимодействие исследуемого вируса с гомологичной сывороткой (или смесью антисывороток), которая нейтрализует вирус, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток. В опыте по нейтрализации вирусную суспензию, содержащую 100 ТЦД_50, смешивают в равном объеме с диагностическими сыворотками. После инкубации в течение 1-2 часов при 370.С, смесь вводят в культуры клеток. Иммунная сыворотка, которая предотвращает развитие ЦПЭ, указывает на тип вируса.

При постановке реакции нейтрализации для идентификации выделенного агента руководствуются вышеуказанными методическими документами.

3.3.4. Серологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

В сыворотке пациента можно обнаружить специфические антитела (нейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, подавляющие гемагглютинацию). Диагностика отдельных случаев заболевания только серологическими методами требует большого количества исследований со всеми известными серотипами энтеровирусов, поэтому ее предпринимают только при наличии данных, позволяющих предполагать тип этиологического агента (характерной клинической картины болезни, выделении и идентификации энтеровируса от больного, наличии вспышки заболеваний, вызванных установленным типом вируса).

Определение антител проводят с диагностической целью или при изучении эпидемиологических аспектов инфекции.

Для диагностических целей необходимы, по крайней мере, две пробы сыворотки, первую из которых берут как можно раньше после начала болезни, а вторую — через 2-3 недели после первой. Диагноз инфекции подтверждается значительным подъемом титра специфических антител во второй пробе. Диагностически значимым считают 4-кратный и больший подъем титра антител.

Для эпидемиологических исследований достаточно одной пробы сыворотки от каждого обследуемого; внимание следует обращать на правильный отбор обследуемых лиц и компоновку групп, чтобы получить наиболее представительные результаты.

В настоящее время для серологической диагностики используют преимущественно реакцию нейтрализации инфекционности. Другие методы выявления антител (реакцию связывания комплемента, преципитацию в агаре, подавление гемагглютинации) используют редко. В основе определения титров антител с помощью реакции нейтрализации лежит принцип взаимодействия известного вируса с гомологичными антителами, присутствующими в сыворотке, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток.

Разведения сыворотки (двукратные или пятикратные до, приблизительно, 1:2500) смешивают с равными объемами разведения вируса, содержащего 100 ТЦД_50 в том объеме смеси, который будет введен в культуру при заражении. Смесь выдерживают 2 часа при 37. и вносят в 2-3 пробирки или лунки с культурой клеток. Контроли должны включать: а) наименьшее (1:4) разведение сыворотки для проверки токсичности; б) контроль качества клеток со средой; в) титрование рабочей дозы вируса. Титром сыворотки считают наибольшее разведение, защищающее 50% зараженных культур от действия 100 ТЦД_50 вируса.

3.3.5. Молекулярно-биологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

Основные сведения об использовании молекулярно-биологических методов для индикации и идентификации энтеровирусов изложены в Методических указаниях 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов».

Разработанные в последние годы молекулярно-биологические методы индикации и типирования энтеровирусов позволяют выявить наличие энтеровирусных геномных последовательностей в исследуемом материале уже через несколько часов после начала работы и установить их типовую принадлежность в большинстве случаев уже через 2-3 дня.

Обязательным условием для получения достоверных результатов при проведении молекулярно-биологической диагностики является наличие квалифицированного персонала. Достоверность и оценка результатов напрямую зависит от грамотности персонала.

Набор помещений и оборудования (ОТ-ПЦР, электрофорез), организация работы должны исключать возможность случайной контаминации исследуемых проб.

Главное преимущество молекулярно-биологических методов — быстрота и достоверность выявления и типирования возбудителей. Это создает возможность раннего этиологического диагноза и экономию на средствах лечения и длительности пребывания в стационаре (например, при снятии диагноза бактериального менингита или сепсиса). При быстрой постановке этиологического диагноза возможно проведение быстрой специфической профилактики (например, введение гаммаглобулина при вспышках энтеровирусного менингита или увеита).

Главным недостатком традиционных методов выделения и типирования энтеровирусов является их длительность.

Быстрота и специфичность определения принадлежности возбудителя могут иметь исключительно важное значение при изучении вспышек заболеваний («молекулярная эпидемиология»). Создается надежная основа для быстрого и точного установления источников инфекции, времени и путей распространения возбудителя, влияния бытовых условий, соблюдения режимов санитарии в больницах, эффективности проведения профилактических мероприятий.

Наиболее часто ОТ-ПЦР используют для диагноза энтеровирусной инфекции путем прямого выявления последовательностей геномной РНК вируса в клинических пробах. Имеется множество модификаций методики, но все методы, способные установить родовые последовательности энтеровирусов, имеют несколько общих узловых характеристик. Наиболее важной из них является использование праймеров для 5″ нетранслируемой области вирусного генома. Опубликованы последовательности многих праймеров, специфичных для различных последовательностей этого региона у разных групп энтеровирусов. Однако, значительная часть праймеров не проверена на достаточно большом числе штаммов, выделенных из клинических материалов, чтобы проконтролировать их реактивность со всеми серотипами и штаммами и, поэтому, не оценена достаточно хорошо для использования в диагностике. Главным преимуществом пан-энтеровирусной ОТ-ПЦР является быстрое выявление энтеровируса, даже с малым количеством исследуемого материала (как, например, СМЖ) и вирусов, которые не размножаются в культурах клеток. Главным недостатком ОТ-ПЦР-диагностики является вариабельность результатов, зависящая, главным образом, от природы исследуемой пробы. Хотя в некоторых случаях ОТ-ПЦР способна уловить единичные копии вирусной РНК, иногда ее чувствительность оказывается намного ниже, например, при исследовании проб кала (но все же, не ниже чувствительности культур клеток).

Молекулярное типирование энтеровирусов основано на ОТ-ПЦР и определении нуклеотидной последовательности в области генома, кодирующей белок капсида VP1. Серотип исследуемого изолята определяют сравнением полученных последовательностей с имеющимися в генном банке последовательностями прототипных энтеровирусов человека. Этот метод несоизмеримо ускоряет типирование и может быть использован для идентификации изолятов, которые трудно или невозможно типировать, используя обычные иммунологические и вирусологические методы. Метод особо полезен для оценки родства штаммов во время вспышек.

4. Эпидемиология неполиомиелитных энтеровирусных инфекций

Энтеровирусы обнаруживают у людей во всех районах земного шара. В тропических и субтропических странах они циркулируют постоянно. В странах с умеренным климатом энтеровирусы наиболее часто встречаются в конце лета и начале осени и могут быстро распространяться среди населения в виде скрытых или явных эпидемий. Из-за отсутствия иммунитета дети наиболее восприимчивы к инфекции энтеровирусами и служат основными их распространителями. Зараженность детей при низком санитарно-гигиеническом уровне жизни может доходить до 50%. Уровень естественного иммунитета с возрастом увеличивается. Чем хуже санитарные условия, тем в более раннем возрасте происходит инфекция, и вырабатывается невосприимчивость. В некоторых районах свыше 90% детей оказываются иммунными к распространенным типам энтеровирусов уже в возрасте 5 лет. С возрастанием уровня личной и коммунальной гигиены циркуляция энтеровирусов сокращается, и увеличивается число лиц, доживающих до взрослого возраста без инфицирования и без иммунитета.

4.1. Пути передачи

Источником инфекции является больной человек или бессимптомный носитель вируса. Вирус выделяется из носоглотки и кишечного тракта и может передаваться как фекально-оральным, так и респираторным путями. Относительная роль каждого из путей передачи остается неясной, по-видимому, она может варьировать в зависимости от сроков после начала болезни (или инфицирования), характеристик вируса и условий окружения. Важным путем является, по-видимому, контакт с загрязненными предметами и руками другого человека с последующей аутоинокуляцией вируса через рот, нос или глаза.

Энтеровирусы регулярно выделяют из сточных вод и по видовому составу и количественному содержанию можно судить об их циркуляции на соответствующих территориях. Поверхностные воды часто контаминированы энтеровирусами (озера, бассейны), их изредка обнаруживали даже в хлорированной водопроводной воде. Доказано, что некоторые вспышки серозного менингита в сибирских городах были связаны с потреблением контаминированной воды. Использование сточных вод для полива сельскохозяйственных угодий и сохранение вируса на овощах не является важным путем передачи вируса.

4.2. Инкубационный период и период заразительности

Инкубационный период широко варьирует, составляя от 2 до 35 дней, в среднем — до 1 недели. Высокая заразительность энтеровирусов убедительно доказана. Заболеваемость детей составляет обычно 10-20%, достигая среди детей самых младших возрастов 50%. Часто наблюдается внутрисемейное распространение инфекции. Эпидемиологические данные указывают, что заразительность инфицированных лиц выше в ранние периоды инфекции, когда возбудитель присутствует в экскретах организма в наибольших концентрациях. Вирус обнаруживают в крови, моче, носоглотке и фекалиях за несколько дней до появления клинических симптомов. Через 2 недели большинство энтеровирусов еще выделяется с фекалиями, но уже не обнаруживается в крови или носоглоточном отделяемом.

4.3. Некоторые характеристики эпидемиологии энтеровирусных инфекций

Такие факторы, как возраст, пол и социально-экономический статус играют существенную роль в эпидемиологии энтеровирусных инфекций.

Большое число неполиомиелитных энтеровирусов, легкость и широта их распространения, зависящие от предыдущих инфекций и связанного с ними иммунитета, объясняют тот факт, что первичные инфекции имеют место преимущественно в детском возрасте. При первичных инфекциях количество выделяемого вируса и длительность его выделения являются наибольшими, поэтому дети являются наиболее важным источником инфекции, особенно в семьях. Вероятность вторичного инфицирования и тяжесть клинических проявлений существенно варьируют для различных энтеровирусов. До 90% и более членов семьи были заражены вирусами острого геморрагического конъюнктивита (энтеровирус типа 70 и Коксаки А24), в то время как другие вирусы — Коксаки и ЕСНО — инфицировали только около 50 — 75% восприимчивых членов семьи, преимущественно детей в возрасте 5 — 9 лет.

Большинство энтеровирусных инфекций протекает более тяжело у взрослых лиц, в то же время, некоторые энтеровирусы (например, ЕСНО 11) вызывают в редких случаях у новорожденных исключительно тяжелое заболевание и быстро приводят к летальному исходу («вирусный сепсис»).

Особую важность имеет распространение энтеровирусных инфекций в организованных детских коллективах (детских садах, школах), когда в группах детей до 50% детей могут оказаться зараженными. Хорошо документированные многочисленные случаи внутрибольничных энтеровирусных инфекций объясняются как недостаточно продуманным устройством больниц (их планировкой, системами сантехники), так и в еще большей мере недостаточной обученностью и дисциплиной персонала по соблюдению мер профилактики внутрибольничных инфекций. Примерами являются вспышки острого энтеровирусного увеита в больницах Красноярска, Омска и Иркутска в 1980 — 1989 гг. с десятками и сотнями заболевших детей, потерявших зрение.

Почти все энтеровирусы могут вызывать как спорадические случаи заболевания, так и быть причиной крупных вспышек или даже пандемий. Энтеровирус 70-го типа вызвал пандемию геморрагического конъюнктивита, которая охватила десятки миллионов человек с большим количеством неврологических осложнений.

Принципиально важной для понимания эпидемиологии энтеровирусных инфекций является их высокая изменчивость: быстро сменяются серотипы энтеровирусов, изменяется географическая локализация вспышек, клиническая картина заболевания. Важно то, что один и тот же серотип вируса может вызывать совершенно различные по клинике заболевания (даже в одной семье в одно время), и что различные серотипы энтеровирусов могут давать заболевания со сходной клинической картиной (например, полиомиелит может быть вызван вирусами полиомиелита, Коксаки А7 или энтеровирусом типа 71).

Характерно, что в одном месте одновременно циркулируют только несколько серотипов энтеровирусов.

Серологическое обследование населения показало, что значительная его часть имеет нейтрализующие антитела к определенным типам энтеровирусов, что говорит о контакте с инфекцией в прошлом. Наличие IgM антител к энтеровирусам у 4 — 6% населения указывает на то, что эта часть популяции перенесла свежую (в течение 1-2 месяцев) энтеровирусную инфекцию. Было установлено также, что инфекция одним типом энтеровируса бустирует титры IgM и нейтрализующих антител к другим серотипам энтеровирусов. Наличие и уровень антител к определенному серотипу варьирует в зависимости от времени, места, возраста. Поэтому интерпретация результатов серологических обследований должна быть весьма осторожной.

4.4. Молекулярная эпидемиология

Нуклеотидная последовательность генома является непревзойденным «маркером» любого вируса и дает возможность проследить его «судьбу» (пути передачи на уровне конкретных пациентов, передачу между географическими областями и т.д.). При высокой степени сходства нуклеотидных последовательностей генома нескольких изолятов из одной эпидемии, можно с уверенностью утверждать, что эпидемия была вызвана одним генотипом вируса и, скорее всего, имела общий источник.

При изучении молекулярной эпидемиологии энтеровирусов наиболее часто определяют полную или частичную последовательность нуклеотидов в области генома VP1, поскольку результаты изучения последовательностей в этой относительно стабильной области генома совпадают с результатами серотипирования и дают ценную информацию о характеристиках штамма.

4.5. Основные направления эпидемиологического надзора за энтеровирусными инфекциями

Эпидемиологический надзор осуществляется органами и учреждениями, осуществляющими государственной санитарно-эпидемиологический надзор.

Целью эпидемиологического надзора является оценка эпидемиологической ситуации и разработка эпидемиологически обоснованных мероприятий, направленных на предупреждение возникновения случаев заболеваний, вызываемых энтеровирусами. Эпидемиологический надзор за энтеровирусными инфекциями представляет собой постоянное наблюдение за эпидемическим процессом и включает:

— слежение за заболеваемостью энтеровирусными инфекциями;

— слежение за циркуляцией энтеровирусов среди населения и в объектах окружающей среды (вода, продукты питания);

— изучение клинических проявлений инфекций (учет различных форм и тяжести течения заболеваний, частоты возникновения и характера осложнений, лабораторное подтверждение диагноза);

— оценка эффективности проводимых мероприятий и принятие административных решений;

— прогнозирование развития эпидемиологической ситуации.

Эпидемиологический анализ заболеваемости энтеровирусными инфекциями является составной частью проведения общего эпидемиологического надзора за заболеваемостью. Особое внимание уделяется анализу причин летальных исходов. Значение имеет анализ данных догоспитального периода, сроки обращения от начала заболевания, сроки госпитализации от момента обращения, первоначальный диагноз, а также анализ лабораторного вирусологического обследования, сроки забора и доставки материала в лабораторию. Эпидемиологический анализ проводится в целом по территории и по отдельным районам, а также по городам и сельской местности.

4.5.1. Учет, регистрация и отчетность о заболеваемости энтеровирусными инфекциями

Диагноз энтеровирусной инфекции устанавливается только на основании лабораторного подтверждения (выделение энтеровируса из биологических материалов, нарастание титра антител).

Врачи всех специальностей, средние медицинские работники лечебно-профилактических учреждений, образовательных, оздоровительных и учреждений социального обеспечения независимо от форм собственности и ведомственной принадлежности при оказании всех видов медицинской помощи обязаны выявлять больных энтеровирусной инфекцией, а также лиц, подозрительных на эту инфекцию.

Выявление больных осуществляется при медицинском осмотре лиц, обращении за медицинской помощью, оказании медицинской помощи на дому, в детских дошкольных, образовательных, оздоровительных других учреждениях, учреждениях социального обеспечения.

На каждый случай энтеровирусной инфекции или подозрения на это заболевание лечебно-профилактическое учреждение немедленно представляет в филиал «Центра гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации экстренное извещение по форме N 058/у (по телефону, электронной почте). Ответственность за полноту и своевременность представления экстренного извещения в филиал «Центра гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации несет руководитель лечебно-профилактического учреждения.

Каждый случай энтеровирусного заболевания (или подозрения на это заболевание) подлежит регистрации и учету по месту его выявления в лечебно-профилактических, детских, подростковых, оздоровительных и других учреждениях, независимо от ведомственной принадлежности и форм собственности, а также в медицинских учреждениях, занимающихся частной практикой, в журнале учета инфекционных заболеваний (форма N 060/у). Лечебно-профилактическое учреждение, уточнившее, изменившее или отменившее диагноз, обязано отослать новое извещение.

Для персонального учета больных и лиц с подозрением на это заболевание, а также для контроля полноты и сроков представления информации в учреждения, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор сведения из экстренных извещений вносятся в журнал учета инфекционных заболеваний как в учреждениях здравоохранения, так и в учреждениях, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор. На каждого больного с подозрением на это заболевание оформляется карта эпидемиологического расследования случая инфекционного заболевания в установленной форме.

При возникновении групповых заболеваний (10 и более случаев) в детских дошкольных, подростковых и лечебно-профилактических учреждениях направляется внеочередное донесение в «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации и Управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации.

При подозрении на серозный менингит или другую форму поражения нервной системы инфекционной этиологии больные должны быть госпитализированы для уточнения диагноза и лечения. В большинстве спорадических случаев заболевания диагноз энтеровирусной инфекции устанавливается поздно, после получения результатов вирусологической диагностики, в конце пребывания больного в стационаре или после его выписки.

4.5.2. Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий

4.5.2.1. Организация профилактических мероприятий

Методы специфической профилактики неполиомиелитных энтеровирусных инфекций не разработаны, как из-за особенностей их эпидемиологии, так и из-за большого числа серотипов. В 70-е годы в нашей стране была разработана инактивированная вакцина против инфекции энтеровирусом типа 71. Она была успешно применена для массовой вакцинации детей в Болгарии после случившейся в этой стране в 1975 году большой эпидемии полиомиелито-подобного заболевания, вызванной энтеровирусом типа 71. Не разработаны также методы неспецифической профилактики неполиомиелитных энтеровирусных инфекций. Массовая вакцинация всего детского населения живой вакциной против полиомиелита купировала вспышки серозного менингита и энтеровирусного увеита в нескольких сибирских городах в разные годы, по-видимому, в результате интерференционного прессинга аттенуированных вирусов полиомиелита.

Профилактические мероприятия, направленные на предупреждение распространения возбудителя, проводятся органами и учреждениями госсанэпидслужбы, здравоохранения, а также гражданами, индивидуальными предпринимателями и юридическими лицами в соответствии с действующим законодательством Российской Федерации.

Комплексные планы противоэпидемических мероприятий разрабатываются управлениями Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, органами управления здравоохранением субъектов Российской Федерации и заинтересованными организациями.

Профилактические мероприятия направлены на предотвращение загрязнения возбудителем объектов окружающей среды, санитарное благоустройство источников водоснабжения, соблюдение правил удаления и обезвреживания нечистот, обеспечения населения безопасными продуктами питания и доброкачественной питьевой водой.

4.5.2.2. Организация и проведение противоэпидемических мероприятий

Противоэпидемические мероприятия в очаге энтеровирусной инфекции направлены на его локализацию с целью максимального недопущения возможного распространения инфекции, выявление источника возбудителя инфекции, в частности, пищевых продуктов или питьевой воды, которые бы могли явиться факторами передачи энтеровирусов, а также на определение круга лиц, подвергшихся риску заражения.

При возникновении заболеваний, имеющих клиническую картину, характерную для энтеровирусной инфекции, необходимо провести следующие мероприятия:

1. Обязательная и как можно более ранняя изоляция заболевших. Особое внимание должно быть обращено на изоляцию больных с легкими формами болезни, являющихся основным источником распространения инфекции по причине ошибочной трактовки заболевания, проходящего часто под диагнозами «грипп», «острый гастрит» и другие. Ранняя изоляция особенно важна в детских организованных коллективах. С целью ранней диагностики и своевременной изоляции заболевших необходимо проводить медицинское наблюдение за контактировавшими детьми с ежедневным осмотром кожи, слизистой зева, с измерением температуры тела.

2. Изоляция больных с легкими формами болезни без ясных признаков поражения нервной системы (энтеровирусная лихорадка, эпидемическая миалгия, герпетическая ангина) проводится сроком на 10 дней, после чего переболевший может быть возвращен в коллектив без дополнительных сроков карантинизации.

3. При подозрении на серозный менингит или другую форму поражения нервной системы энтеровирусной этиологии больные должны быть госпитализированы в стационар с целью уточнения диагноза, проведения рационального лечения и режима, предупреждающего дальнейшие нарушения функций центральной нервной системы. Выписку из стационара больных, после перенесенного серозного менингита или других форм поражения нервной системы целесообразно проводить не ранее двух недель от начала болезни (учитывая сроки нормализации клинических проявлений заболевания, нормализации спинномозговой жидкости) с последующим щадящим режимом на такой же срок.

4. При появлении первых случаев заболевания карантин в детских коллективах накладывается сроком на 10 дней. При массовом распространении заболеваний среди населения города, района и т.д. рекомендуется перевод детских дошкольных учреждений на круглосуточную работу. Обнаружение энтеровирусов у контактировавших здоровых лиц не требует специальных мер лечения и профилактики этой инфекции.

5. В случаях массового распространения заболевания следует запретить проведение массовых мероприятий.

6. Организовать подворные обходы с целью выявления лиц больных, подозрительных на заболевание и изоляцию их.

7. Проводить вирусологическое и серологическое (парные сыворотки) обследования больных.

8. Проводить вирусологическое и серологическое (по показаниям) обследования контактных лиц в очагах.

8. Дезинфекционные мероприятия в очагах проводить, так же, как при инфекционных заболеваниях с фекально-оральным механизмом передачи вирусной этиологии.

9. Несмотря на определенные успехи, достигнутые в изучении клинки, этиологии и эпидемиологии заболеваний, вызванных вирусами Коксаки и ECHO, до настоящего времени, кроме перечисленных противоэпидемических мероприятий, не разработаны методы специфической и неспецифической профилактики этих инфекций.

Одним из перспективных методов борьбы с энтеровирусными инфекциями является антагонистическое действие на болезнетворный энтеровирус аттенуированных штаммов Сэбина (живой полиомиелитной вакциной). Этот способ был успешно использован для купирования вспышек серозного менингита в Республике Калмыкия, Свердловской и Иркутской областях, вспышках полио-подобного заболевания, вызванного EV71 в Болгарии и вспышек острого энтеровирусного увеита в ряде городов Сибирского федерального округа.

Принцип действия ОПВ при купировании эпидемии серозного мененигита# основано на быстром (2-3 дня) заселении кишечника в 80 — 90% детей от 1 года до 14 лет вакицнным# полиовирусом и как следствие, вытеснниее# из циркуляции энтеровирусов — возбудителей серозного мененигита.# Вакцинацию (1-кратно) надо проводить на подъеме заболеваемости не дожидаясь, когда число заболевших достигнет нескольких сот человек.

4.6. Гигиеническое воспитание и обучение граждан по вопросам профилактики энтеровирусных инфекций

4.6.1. Гигиеническое воспитание и обучение населения осуществляют в процессе воспитания и обучения в дошкольных и других образовательных учреждениях, при профессиональной и гигиенической подготовке и аттестации должностных лиц и работников организаций, деятельность которых связана с производством, хранением, транспотртированием# и реализацией пищевых продуктов и питьевой воды, воспитанием и обучением детей, коммунально-бытовым обслуживанием населения, а также при проведении профилактических медицинских осмотров.

4.6.2. Координацию и руководство гигиеническим воспитанием и обучением населения мерам личной и общественной профилактики энтеровирусных заболеваний осуществляют органы и учреждения, осуществляющие государственный санитарно-эпидемиологический надзор. Эта работа должна проводиться в тесном контакте с заинтересованными учреждениями и организациями.

4.6.3. В целях гигиенического воспитания и обучения населения используют каналы массовой информации (местная печать, радио, телевидение и т.д.), а также струдничают# с общественными и культурно-просветительными организациями.

Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко

Методические указания МУ 3.1.1.2130-06 “Энтеровирусные заболевания: клиника, лабораторная диагностика, эпидемиология, профилактика” (утв. и введены в действие Главным государственным санитарным врачом РФ 9 сентября 2006 г.)

Текст методических указаний размещен на сайте Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в Internet (http://www.rospotrebnadzor.ru)

1. Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Лазикова Г.Ф., Ежлова Е.Б.), ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ясинский А.А., Котова Е.А., Чернявская О.П., Сорокина М.П.), Институтом полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (Михайлов М.И., Деконенко Е.П., Дроздов С.Г., Иванова О.Е., Карганова Г.Г., Королева Г.А., Лашкевич В.А. Лещинская Е.В, Лукашев А.Н., Мустафина А.Н., Сейбиль В.Б.), ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в Хабаровском крае (Резник В.И.).

При подготовке Методических указаний учтены замечания и предложения управлений Роспотребнадзора по Пензенской, Нижегородской, Ярославской, Свердловской областям, Ставропольскому краю, городу Москве.

2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2006 г.

3. Введены впервые.

Дата введения: с момента утверждения

РЦРЗ (Республиканский центр развития здравоохранения МЗ РК)
Версия: Клинические протоколы МЗ РК — 2017

Категории МКБ: Другие уточненные инфекции, характеризующиеся поражением кожи и слизистых оболочек (B08.8), Энтеровирусная инфекция неуточненная (B34.1), Энтеровирусная экзантематозная лихорадка (A88.0), Энтеровирусный везикулярный стоматит с экзантемой (B08.4), Энтеровирусный везикулярный фарингит (B08.5)

Разделы медицины: Инфекционные и паразитарные болезни

Общая информация Краткое описание

Одобрено
Объединенной комиссией по качеству медицинских услугМинистерства здравоохранения Республики Казахстанот «12» мая 2017 года
Протокол №22

Энтеровирусные инфекции (Enterovirosis) – группа антропонозных острых инфекционных заболеваний,  вызываемых энтеровирусами, характеризующихся лихорадкой и полиморфизмом клинической картины (с преимущественным поражением ЦНС, сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, мышечной системы, слизистых оболочек и кожи).

ВВОДНАЯ ЧАСТЬ:

Код(ы) МКБ-10:

МКБ-10
Код Название
А85.0 Энтеровирусный энцефалит, энтеровирусный энцефаломиелит
А87.0 Энтеровирусный менингит; менингит, вызванный вирусом Коксаки/менингит, вызванный ЕСНО-вирусом
А88.0 Энтеровирусная экзантематозная лихорадка (бостонская экзантема)
В08.4 Энтеровирусный везикулярный стоматит с экзантемой, вирусная пузырчатка полости рта и конечностей
В08.5 Энтеровирусный везикулярный фарингит, герпетическая ангина
В08.8 Другие уточнённые инфекции, характеризующиеся поражением кожи и слизистых оболочек; энтеровирусный лимфонодулярный фарингит
В34.1 Энтеровирусная инфекция неуточнённая; инфекция, вызванная вирусом Коксаки, БДУ; инфекция, вызванная ЕСНО-вирусом, БДУ

 
Дата разработки протокола: 2017 год.
 
Сокращения, используемые в протоколе:

АД артериальное давление
ДВС диссеминированное внутрисосудистое свертывание
ИВЛ искусственная вентиляция легких
ИТШ инфекционно-токсический шок
ИФА иммуноферментный анализ
КТ компьютерная томография
МРТ магнитно-резонансная томография
МКБ международная классификация болезней
ОАК общий анализ крови
ОАМ общий анализ мочи
ОПП острое повреждение почек
ОРИТ отделение реанимации и интенсивной терапии
ПЦР полимеразная цепная реакция
РНК рибонуклеиновая кислота
РН реакция нейтрализации
РНГА реакция непрямой гемагглютинации
РСК реакция связывания комплемента
СЗП свежезамороженная плазма
СМЖ спинномозговая жидкость
СОЭ скорость оседания эритроцитов
УЗИ ультразвуковое исследование
ЦНС центральная нервная система
ЭВИ энтеровирусная инфекция
ЭКГ электрокардиография
ЭхоКГ эхокардиография
ЭЭГ электроэнцефалография

 
Пользователи протокола: врачи скорой неотложной помощи, фельдшеры, врачи общей практики, инфекционисты, терапевты, невропатологи, офтальмологи, дерматовенерологи, оториноларингологи, хирурги, анестезиологи-реаниматологи, организаторы здравоохранения.
 
Категория пациентов: взрослые.
 
Шкала уровня доказательности:

А Высококачественный мета-анализ, систематический обзор РКИ или крупное РКИ с очень низкой вероятностью (++) систематической ошибки, результаты которых могут быть распространены на соответствующую популяцию.
В Высококачественный (++) систематический обзор когортных или исследований случай-контроль или высококачественное (++) когортных или исследований случай-контроль с очень низким риском систематической ошибки или РКИ с невысоким  (+) риском систематической ошибки, результаты которых могут быть распространены на соответствующую популяцию.
С Когортное или исследование случай-контроль или контролируемое исследование без рандомизации с невысоким риском систематической ошибки (+), результаты которых могут быть распространены на соответствующую  популяцию или РКИ с очень низким или невысоким риском систематической ошибки (++ или +), результаты которых не могут быть непосредственно распространены на соответствующую популяцию.
D Описание серии случаев или неконтролируемое исследование или мнение экспертов.
GPP Наилучшая клиническая практика.

 
Классификация

Классификация В зависимости от выраженности клиническ

их проявлений:
·     бессимптомная (доклиническая);
·     манифестная (клиническая);

В зависимости от клинической формы: ·     типичные формы:

— герпетическая ангина;
— эпидемическая миалгия;
— асептический серозный менингит;
— энтеровирусная экзантема;
·      атипичные формы:
— инаппарантная форма;
— малая болезнь («летний грипп»);
— катаральная (респираторная) форма;
— энцефалитическая форма;
— энцефаломиокардит новорожденных;
— полиомиелитоподобная (спинальная) форма;
— эпидемический геморрагический конъюнктивит;
— увеит;
— нефрит;
— панкреатит.
·     смешанные формы (микст-инфекция):
— менингит и миалгия;
— менингит и герпангина;
— герпангина и экзантема;
— другие.

В зависимости от тяжести течения: ·     легкая;

·     среднетяжелая;
·     тяжелая.

Критерии тяжести: — выраженность синдрома интоксикации;

— выраженность местных изменений;
 

В зависимости от течения: ·     острое гладкое;

·     с осложнениями;
·     рецидивирующее.

В зависимости от наличия осложнений: ·     неосложненная форма;

·     осложненная форма (с указанием осложнения):
−       пневмония;
−       острый респираторный дистресс-синдром;
−       отек-набухание головного мозга;
−       судорожный синдром;
−       гиповолемический шок;
−       острое почечное повреждение;
−       другие.
Диагностика

МЕТОДЫ, ПОДХОДЫ И ПРОЦЕДУРЫ ДИАГНОСТИКИ

Диагностические критерии Жалобы на момент осмотра иили в анамнезе:Бессимптомная (доклиническая) стадия: активно жалоб не предъявляет.

Клиническая стадия (неосложненная): жалобы и клинические проявления зависят от формы заболевания. Нередко наблюдаются сочетанные признаки различных клинических форм.

Наиболее частые клинические проявления ЭВИ: ·          Острое начало;

·          Лихорадка (до 38 — 40ͦ С);
·          Головная боль;
·          Слабость, недомогание;
·          Головокружение;
·          Тошнота, рвота;
·          Гиперемия зева;
·          Зернистость задней стенки глотки;
·          Гиперемия лица, шеи, верхней половины туловища;
·          Сыпь на лице, туловище, конечностях (в том числе, ладонях и стопах);
·          Энантема на слизистой полости рта;
·          Инъекция сосудов склер.

Наименование клинической формы Основные жалобы Клинические проявления
Герпангина ·   повышение температуры до 39,0–40,5°С
·   боли в горле (умеренно выражены или отсутствуют)
Общее состояние относительно удовлетворительное. Гиперемия слизистой оболочки мягкого нёба, нёбных дужек, язычка, задней стенки глотки. В течение 24–48 ч появляется от 5–6 до 20–30 мелких папул серовато-белого цвета диаметром 1–2 мм, которые могут встречаться группами или отдельно. Дальнейшая динамика – пузырьки-эрозии. Вокруг эрозий образуется венчик гиперемии. Эрозии заживают в течение 4–6 дней без дефектов слизистой оболочки. Заболевание нередко рецидивирует.
Эпидемическая миалгия (плевродиния, болезнь Борнхольма) ·   повышение температуры до 39,0–40,5°С
·   общая слабость, тошнота (нередко рвота)
·   сильная головная боль
·   боль в грудных мышцах, эпигастральной и пупочной областях, спине, конечностях
Боли усиливаются при движении, кашле, часто становятся мучительными и сопровождаются обильным потоотделением. Продолжительность болевых приступов составляет от 5–10 мин до нескольких часов (чаще 15–20 мин). Зев гиперемирован, на слизистой оболочке неба нередко выявляют зернистость, характерен шейный лимфаденит. У некоторых больных отмечают гепатоспленомегалию. Средняя продолжительность болезни составляет 3–7 дней. При волнообразном течении заболевания (2–3 обострения с интервалом в 2–4 дня) продолжительность болезни увеличивается до 1,5–2 недель.
Серозный менингит ·   повышение температуры до 39,0–40,5°С
·   сильная головная боль распирающего характера
·   повторная рвота, не приносящая облегчение
Характерна общая гиперестезия (гиперакузия, фотофобия, гиперестезия кожи). Менингеальные симптомы. В ряде случаев наблюдается психомоторное возбуждение и судороги. Возможны катаральные явления. Нередко возникает метеоризм, при пальпации живота обнаруживается урчание.
Энтеровирусная экзантема (эпидемическая, или бостонская, экзантема, а также кореподобная и краснухоподобная экзантемы) ·   повышение температуры до 39,0–40,5°С
·   общая слабость
·   выраженные головная и мышечные боли
·    боли в горле
·   сыпь на лице, туловище, конечностях, в частности, кистях и стопах
·   энантема на слизистой полости рта
Относится к числу лёгких форм ЭВИ. Сыпь краснухоподобная, реже макуло-папулезная, буллезная, петехиальная, сохраняется 2–4 дня. Отмечается пятнистая энантема на слизистой оболочке ротоглотки. Шейный лимфаденит. В остром периоде нередко возникают фарингит, конъюнктивит. Могут быть явления менингизма или сочетание с серозным менингитом. В ряде случаев отмечается синдром Кисть-Стопа-Полость рта. Лихорадка длится 1–8 дней.
Малая болезнь (Коксаки- и ЕСНО-лихорадка; трёхдневная, или неопределённая, лихорадка; «летний грипп») ·   повышение температуры
·   слабость
·   умеренная головная боль
·   рвота
·   миалгия
·   боль в животе
Клинически характеризуется кратковременной лихорадкой (не более 3 дней). Катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей возникают менее чем у двух третей больных. Возможно двухволновое течение болезни.
Катаральная (респираторная) форма ·   повышение температуры
·   насморк
·   сухой кашель
·   слабость
 
Распространенная форма ЭВИ. Характерен ринит с серозно-слизистыми выделениями, сухой кашель, гиперемия и зернистость слизистой оболочки зева. Возможны проявления болезни в виде фарингита с регионарным лимфаденитом и кратковременной субфебрильной лихорадкой. В неосложнённых случаях лихорадка сохраняется около 3 дней, катаральные явления — около недели.
Энтеровирусная диарея (вирусный гастроэнтерит, «рвотная болезнь») ·   повышение температуры до 38,0–39,0 °С
·   жидкий стул
·   отсутствие аппетита
·   многократная рвота
·   катаральные явления (часто)
 
Лихорадочный период продолжается в среднем около недели. Одновременно с увеличением температуры тела отмечают жидкий стул без патологических примесей до 2–10 раз в сутки. Характерно вздутие живота, возможна болезненность при пальпации (более выраженная в илеоцекальной области). Аппетит отсутствует, язык обложен. В первые дни нередко отмечается многократная рвота, однако даже при продолжительности диспепсических явлений от 2 дней до 1,5–2 нед., значительного обезвоживания не наступает. Иногда отмечается гепатоспленомегалия. Часто наблюдаются признаки катарального воспаления верхних дыхательных путей.
Паралитическая форма (спинальная, полиомиелитоподобная) ·   незначительное повышение температуры
·   парез нижних конечностей (утренняя хромота)
Чаще регистрирует в теплое время года в виде спорадических случаев у детей 1–5 лет. Протекает преимущественно в виде легких паралитических форм. Тяжелые формы возникают редко. У трети больных отмечают препаралитический период, для которого характерны симптомы, свойственные другим формам энтеровирусной инфекции (малой болезни, респираторной, герпангине). Чаще парезы возникают остро, на фоне полного здоровья. Возникает нарушение походки в виде прихрамывания, при этом подгибается колено, свисает стопа, наблюдается ротация ноги кнаружи и снижение мышечного тонуса. Поверхностные и глубокие рефлексы не нарушаются; реже отмечают гипо- или гиперрефлексию. Парезы проходят относительно быстро, обычно с полным восстановлением двигательных функций, но в редких случаях в течение нескольких месяцев сохраняется гипотония и гипотрофия поражённых мышц.
Энцефалиты и менингоэнцефалиты ·   повышение температуры до 39,0–40,5°С
·   сильная головная боль
·   повторная рвота, не приносящая облегчение
Характерна общая гиперестезия (гиперакузия, фотофобия, гиперестезия кожи). Менингеальные симптомы. В тяжелых случаях — нарушение сознания, возможны судороги, очаговая неврологическая симптоматика (нистагм, параличи черепных нервов и т.д.).
Перикардиты и миокардиты ·   умеренное повышение температуры
·   общая слабость
·   боли в области сердца
Чаще поражение сердца развивается у детей старшего возраста и взрослых после перенесённой респираторной формы энтеровирусной инфекции (через 1,5–2 нед), реже — изолированно. При осмотре выявляют расширение границ сердца, глухость тонов, шум трения перикарда. Течение заболевания доброкачественное, прогноз благоприятный.
Эпидемический геморрагический конъюнктивит ·   ощущение инородного тела, «песка» в глазах
·   слезотечение
·   фотофобия
 
Заболевание начинается остро с поражения одного глаза. В ряде случаев через 1–2 дня поражается и другой глаз. При осмотре выявляются отёк век, кровоизлияния в гиперемированную конъюнктиву и скудное слизисто-гнойное или серозное отделяемое. Болезнь чаще протекает доброкачественно, выздоровление наступает через 1,5–2 нед.

Энтеровирусная инфекция и беременность :
Новорожденный может инфицироваться внутриутробно, но чаще  —  во время родов или сразу после них. Результат зависит от вирулентности конкретного циркулирующего серотипа, способа передачи инфекции и наличия или отсутствия пассивно передаваемых материнских антител.
Перенесенная инфекция Коксаки во время беременности может вызывать врожденные пороки развития сердечно-сосудистой (тетрада Фалло, атрезия аорты, атрезия трикуспидального клапана), мочеполовой и пищеварительной систем у новорожденного. Энтеровирус может быть причиной развития тяжелой инфекции центральной нервной системы у новорожденных.
 

Эпидемиологический анамнез: ·          контакт с больным с лихорадкой, симптомами интоксикации, явлениями поражения ЦНС, желудочно-кишечного тракта, мышц, слизистой оболочки, кожи, в течение последних 2-10 дней;

·          контакт с вирусоносителем или больным с подтвержденным диагнозом «Энтеровирусная инфекция» в течение последних 2-10 дней;
·          пути передачи – водный, пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный, трансплацентарный;
·          факторы передачи – фекалии, секрет конъюнктивы, слюна, слеза, содержимое носа, мокрота, содержимое везикул (экзантема), пищевые продукты (вода, овощи, реже молоко), предметы обихода (игрушки);
·          эпидемиологические факторы:
– несоблюдение личной гигиены;
– употребление воды из питьевых фонтанчиков;
– несоблюдение «респираторного этикета» (неиспользование масок, носовых платков);
– купание в фонтанах и непроточных водоемах;
–пребывание в местах массового скопления людей, в общественном транспорте;
– покупка продуктов «с рук»;
– сезонность летне-осенняя;
– характерны семейные и групповые вспышки.
·          заболевание распространено повсеместно, восприимчивость всеобщая;
·          группы риска: дети (чаще), лица молодого возраста, беременные, лица с нарушениями иммунной системы.
 

Лабораторные исследования :Основные: ·          ОАК: лейкопения, лейкоцитоз, относительный лимфоцитоз, моноцитоз, умеренное повышение СОЭ.

·          ОАМ: протеинурия, цилиндрурия, микрогематурия (при токсическом поражении почек).
·          ИФА или РПГА – используются парные сыворотки, полученные с интервалом в 10–12 дней (первая на 4–5-й день болезни, вторая – после 14-го дня болезни). Диагностический критерий – нарастание титра антител в 4 раза и более.
·          ПЦР фекалий (носоглоточной слизи) на Enterovirus: детекция РНК Enterovirus.
·          исследование СМЖ (при менингите):
— цвет – ликвор прозрачный, или слегка опалесцирующий;
— давление – жидкость вытекает струей или частыми каплями;
— лимфоцитарный плеоцитоз;
— повышение белка до 1-4,5 г/л (наиболее высокое — при развитии менингоэнцефалита);
— сахар в норме;
— снижение хлоридов.
 

Дополнительные: ·  иммунохроматографический тест фекалий на энтеровирус;

·          тест Xpert EV на энтеровирус в образцах СМЖ у пациентов с симптомами менингита (на основе ПЦР-анализа).

Инструментальные методы диагностики – проводятся по показаниям (при развитии осложнений):

·          ЭКГ: признаки миокардита;
·          рентгенография органов грудной клетки: признаки пневмонии;
·          КТ и МРТ головного мозга: отек головного мозга, признаки менингоэнцефалита, дисциркуляторная энцефалопатия;
·          УЗИ: оценка размеров печени и селезенки;
·          ЭхоКГ: признаки миокардита, эндокардита, сердечной недостаточности;
·          ЭЭГ: признаки судорожной активности, гибели мозга при энцефалите.
 

Показания для консультации специалистов: Показания к консультации других специалистов определяет форма инфекции:

·          консультация хирурга  – при эпидемической миалгии;
·          консультация офтальмолога – при эпидемическом геморрагическом конъюнктивите;
·          консультация кардиолога  – при перикардитах и миокардитах;
·          консультация невропатолога – при менингите и менингоэнцефалитической форме энтеровирусной инфекции;
·          консультация пульмонолога – при развитии пневмонии и бронхитов;
·          консультация дерматолога – при поражении кожных покровов;
·          консультация реаниматолога – для определения показаний перевода в ОРИТ.
 

Диагностический алгоритм: (схема)методические рекомендации по лечению энтеровирусной инфекции

Дифференциальный диагноз

Дифференциальный диагноз и обоснование дополнительных исследований

Заболевание Сходные симптомы Отличительные симптомы Лабораторные тесты
Инфекционный мононуклеоз Лимфоаденопатия, ангина, гепатолиенальный синдром, лихорадка Длительность не более 1 мес., преобладает системное увеличение лимфоузлов. Положительный тест Пауля-Буннеля.
В крови атипичные мононуклеары более 10%.
Краснуха Увеличение затылочных лимфоузлов, экзантема Эпиданамнез, кратковременность симптомов, поражаются только затылочные лимфоузлы. Антитела к вирусу краснухи в нарастающем титре.
Токсоплазмоз Энцефалит, лимфоаденопатия, гепатомегалия, желтуха, экзантема. Эпиданамнез, хориоретинит, кальцификаты в головном мозге, висцеральные поражения. Бактериология, серология, РСК, РНИФ, кожная проба
Острый менингоэнцефалит (вирусной, бактериальной этиологии). Менингеальный, энцефалический синдром, полиомиелитоподобный синдром Эпиданамнез, более четко очерчена клиническая картина, при бактериальных неменингококковых менингитах — наличие очагов инфекции. Микробиология, серология, вирусология, иммунофлюоресцентный метод диагностики
Аденовирусная инфекция Лихорадка, назофарингит, лимфаденит Эпиданамнез, острое течение, лимфаденит преимущественно регионарных лимфоузлов  Вирусология, серология с нарастанием титра АТ, иммунофлюоресцентное исследование, гемограмма.
Энтеровирусная инфекция Лихорадка, экзантема, полиадения, гепатолиенальный синдром, энцефалит. Герпангина, диарея, лимфаденит менее выражен. Серология в нарастающем титре.
Сепсис Лихорадка, интоксикация, полиорганность проявлений, экзантема, менингит, отит, синусит, пневмонии.  Наличие первичного очага (кожа, легкие, кишечник и др.) Выделение возбудителя из крови и др. материала, отрицательный тест на ВИЧ-АТ, гипогаммаглобулинемия, нормальное количество СД-4.
Хронический вирусный гепатит Снижение аппетита, увеличение печени, селезенки, полиадения, желтуха. Связь с перенесенным вирусным гепатитом, симптоматика выражена умеренно, полиорганность не характерна. Маркеры ВГ (А, В, С, Д) в сыворотке крови, снижение СД-8, уровень СД-4 нормальный.
Кишечная инфекция, сальмонеллез (генерализованная форма). Диарея, потеря массы, лихорадка, интоксикация, наличие очагов в других органах (менингит, пневмония) Генерализованные формы развиваются только у детей первых месяцев жизни Преморбидный фон отягощен, чаще внутрибольничная инфекция Посевы кала, крови, серология (РПГА)
Глистные инвазии. Снижение аппетита, вялость, снижение массы тела, диарея, полиадения. Эпидемиология, синдром мальабсорбции не характерен. Обнаружение личинок гельминтов в кале, дуоденальном содержимом, мокроте, моче.
Туберкулез Полиадения, интоксикация, поражение легких, ЦНС, лихорадка, потеря массы тела, слабость, гепатолиенальный синдром. Эпиданамнез, наличие первичного комплекса в легких Бактериология — выделение БК из мокроты, Rg- исследование легких (очаги, каверны). Туберкулиновые пробы.
Эпидемический паротит и паротиты другой этиологии. Увеличение околоушных слюнных желез. При эпидпаротите: возникает остро, проходит в течении 10 дней, могут вовлекаться другие слюнные железы, орхиты, панкреатиты. При опухоли, слюннокаменной болезни — процесс односторонний. Серологические исследования с нарастанием титра антител (РНГА). Rg — логические методы исследования. 

Диагноз Обоснование для дифференциальной диагностики Обследования Критерии исключения диагноза
Серозный менингит и менингоэнцефалитическая форма энтеровирусной инфекции Паротитная инфекция
Туберкулезный менингит
Менингококковая инфекция
Пневмококковый менингит
Hib менингит
Паротит, панкреатит, орхит
Бак.исследование крови, ликвора, мокроты на TBC,
Бак.исследование мазка из зева, ликвора, крови на менингококк,
пневмококк, гемофильную палочку
-ИФА  (IgM)
-ПЦР   фекалий
 
Эпидемическая миалгия Острая хирургическая патология
Плеврит
Стенокардия
Консультация хирурга
Рентгенография легких
ЭКГ
-РН, РСК, РТГА и реакция преципитации в геле с энтеровирусным антигеном
-ПЦР крови, ликвора
-вирусологическое исследование  носоглоточной слизи, СМЖ, фекалий, крови
 
Полиомиелитоподобная форма энтеровирусной инфекции Полиомиелит Вирусологическое исследование крови, кала -РН, РСК, РТГА и реакция преципитации в геле с энтеровирусным антигеном
-ПЦР крови, ликвора
-вирусологическое исследование  носоглоточной слизи, СМЖ, фекалий, крови
 
Энтеровирусная экзантема Скарлатина
Корь
Краснуха
Аллергия
Этапность высыпаний, характер и локализация экзантемы -РН, РСК, РТГА и реакция преципитации в геле с энтеровирусным антигеном
-ПЦР крови, ликвора
-вирусологическое исследование  носоглоточной слизи, СМЖ, фекалий, крови
 
Герпангина Афтозный стоматит   -РН, РСК, РТГА и реакция преципитации в геле с энтеровирусным антигеном
-ПЦР крови, ликвора
-вирусологическое исследование  носоглоточной слизи, СМЖ, фекалий, крови
 
Энтеровирусная диарея Острые диарейные инфекции Бак.исследованиекала на патогенную флору -РН, РСК, РТГА и реакция преципитации в геле с энтеровирусным антигеном
-ПЦР крови, ликвора
-вирусологическое исследование  носоглоточной слизи, СМЖ, фекалий, крови
 

 

Алгоритм дифференциального диагноза серозных менингитов: 

 Симптомы Энтеровирусный менингит Паротитный менингит Туберкулезный менингит
Возраст Дошкольного и школьного возраста Дошкольного и школьного возраста Любой
Эпидемиологические предпосылки Лето-осень Зима-весна Социальные факторы или контакт с больным, в анамнезе — легочной или внелегочной туберкулез, ВИЧ-инфекция
Начало болезни Острое Острое Постепенное, прогрессирующее
Клиника Головная боль, резкая, непродолжительная, многократная рвота, лихорадка до 38,5-39ºС, двухволновая лихорадка с интервалами между волнами 1-5 дней В разгар болезни, после воспаления слюнных желез, но иногда и до развития паротита появляется сильная головная боль, рвота, гипертермия Умеренная головная боль, лихорадка до 37-39ºС
Органные поражения органов Энтерит, экзантема, герпангина, миалгии, гепатолиенальный синдром Поражение слюнных желез (паротит, субмаксиллит, сублингвит), орхит, панкреатит Специфическое поражение различных органов, туберкулез лимфоузлов при гематогенной диссеминации
Менингеальные симптомы С 1-2- го дня болезни, слабо выражен, кратковременный, в 20% случаев отсутствует Положительные Менингеальные симптомы Умеренно выраженные, в динамике с нарастанием
Общий анализ крови Норма, иногда небольшой лейкоцитоз или лейкопения, нейтрофилез, умеренное повышение СОЭ Норма, иногда небольшой лейкоцитоз или лейкопения, нейтрофилез, умеренное повышение СОЭ Незначительные изменения показателей лейкограммы, умеренное повышение СОЭ
Цвет, прозрачность ликвора Бесцветная, прозрачная Бесцветная, прозрачная Прозрачная, при стоянии в течение 72 часов выпадает нежная пленка фибрина
Плеоцитоз (кл/мкл) В начале смешанный, затем лимфоцитарный от нескольких
сотен до 2000
Лимфоцитарный
от нескольких
сотен до 500
Смешанный от 30 до
нескольких
сотен
Содержание белка в ликворе (г/л) В норме или снижен В норме или повышен до 1,0 1,0-10,0
Содержание глюкозы в ликворе Умеренно повышено В норме или умеренно повышено Значительно снижено
Содержание хлоридов (ммоль/л) Умеренно повышено Умеренно повышено Значительно снижено

Дифференциальный диагноз заболеваний, сопровождающихся экзантемой:  

Симптомы Менингококцемия Корь Скарлатина Псевдотуберкулез Энтеровирусная экзантема
Начало заболевания Острое, часто бурное, с повышением температуры тела, нарушением общего состояния Катаральные явления и интоксикация, усиливающиеся в течение 2-4 дней Острое, повышение температуры, боль в горле, рвота Острое, с постепенным нарастанием симптомов, повышение температуры, боль в животе
 
Острое, с повышением температуры тела, нарушением общего состояния
 
Температурная реакция Быстрый подъем до высоких цифр в первые часы заболевания До 38-390С, двухволновая (в катаральный период и в период высыпаний) Высокая, до 38-39С0 в течение 2-3 дней Высокая, длительная лихорадка, может быть волнообразная от
субфебрильных до фебрильных цифр различной 
продолжительности (от 1 до 7—10 дней)
Интоксикация Выраженная Выраженная в течение 5-7 дней Выраженная Выраженная, длительная Умеренно выраженная
Катар верхних дыхательных путей Явления назофарингита Выраженный: лающий кашель, ринит, коньюнктивит
 
Отсутствует Отсутствует
 
Герпетические высыпания на небных дужках, мягком небе, признаки фарингита
Время появления сыпи 1-й день болезни, первые часы заболевания На 3-4-й день болезни 1-2-й день болезни 3-8-й день заболевания 1-3 й день болезни
Порядок высыпаний Одномоментно Этапность высыпаний, начиная с лица, в течение 3-х дней Одномоментно
 
Одномоментно
 
Одномоментно
 
Мофрология сыпи Геморрагическая, звездчатая неправильной формы, в центре – некроз Пятнисто-папулезная, неправильной формы, склонная к слиянию на неизмененном фоне кожи Мелкоточечная , обильная на гиперемирован
ном фоне кожи  
Полиморфная (мелкоточечная, мелкопятнистая) на неизменном фоне кожи Мелкоточечная или мелкая пятнисто-папулезная, иногда – геморрагическая
Размер сыпи От петехий до обширных кровоизлияний Средней величины и крупные Мелкая Мелкая Мелкая
Локализация сыпи Ягодицы, бедра, реже – руки и лицо В зависимости от дня высыпаний (1-й день- на лице, 2-й день- на лице и туловище, 3-й день- на лице, туловище и конечностях) По всему телу (кроме носогубного треугольника), преимущественно на сгибательных поверхностях, симметричное сгущение в естественных складках На сгибательных поверхностях конечностей, вокруг суставов, по типу «носков», «перчаток», «капюшона» На лице, туловище и конечностях
Обратное развитие сыпи Некрозы и рубцы в месте обширных кровоизлияний Переходит в пигментацию в том же порядке, в каком и появилась Исчезает бесследно через 3- 5 дней Исчезает бесследно Сыпь сохраняется в течение нескольких часов или в течение суток и исчезает, не оставляя следа, пигментации.
Шелушение Отсутствует Мелкое отрубевидное Крупнопластинчатое, на 2-3 неделе заболевания Мелкое отрубевидное на туловище и крупнопластинчатое на ладонях, стопах на 5-6 -й день Отсутствует
Изменения в ротоглотке Гиперемия, гиперплазия лимфоидных фолликулов задней стенки глотки Разлитая гиперемия слизистой, пятна Бельского-Филатова- Коплика, энантема на мягком небе Ограниченная гиперемия зева, явление гнойной ангины, малиновый язык Малиновый язык На слизистой небных дужек, мягком небе — папулы, которые в динамике превращаются в везикулы. Через 1-2 дня везикулы изъязвляются и покрываются белым детритом.
Изменения других органов и систем Может сочетаться с менингитом Конъюнктивит, ларингит, пневмония
 
Отсутствует Поражение кишечника, печени, селезенки, суставов Может сочетаться с менингитом, герпангиной
Общий анализ крови Гиперлейкоцитоз, нейтрофилез, повышение  СОЭ Лейкопения, нейтропения, при осложнениях — повышение СОЭ Лейкоцитоз, нейтрофилез, ускоренная СОЭ Высокий лейкоцитоз и нейтрофилез, значительное повышение СОЭ Умеренный лейкоцитоз с нейтрофилезом, СОЭ в пределах нормы или умеренно повышено

Медицинский туризм

Пройти лечение, проверить здоровье за границей: Корея, Турция, Израиль, Германия, Испания, США, Китай и другие страны

Выбрать иностранную клинику

Бесплатная консультация по лечению за рубежом! Оставьте заявку ниже

Лечение Лечение (амбулатория)

ТАКТИКА ЛЕЧЕНИЯ НА АМБУЛАТОРНОМ УРОВНЕ : в случаях легкого течения заболевания пациенты могут лечиться на амбулаторном уровне.

Немедикаментозное лечение: ·          Режим: постельный (до купирования основных клинических проявлений);

·          Диета: общий стол (№ 15), обильное питье, молочно-растительная диета. 
 

Медикаментозное лечение: Этиотропная терапия не проводится.

 

Патогенетическая терапия: Дезинтоксикационная терапия. Обильное питье — до 2,5-3,0 л в сутки.

При высокой лихорадке — нестероидные противовоспалительные препараты, один из нижеперечисленных в течение 1-3 дней:
· ацетаминофен 500 мг, внутрь; суппозитории ректальные 0,25; 0,3 и 0,5 г (при гипертермии выше 38°С);

или · диклофенак натрия по 75-150мг в сутки в 2-3 приема, внутрь.

 

Симптоматическая терапия: ·     при герпангине – полоскание ротоглотки растворами антисептиков; 

·     при эпидемической миалгии – НПВС;
·     при конъюнктивите — – ципрофлоксацин 3мгмл, 5 мл, глазные капли, сульфацетамид 30%-20 мл, глазные капли.

При бактериальных осложнениях – макролиды или бета-лактамные антибактериальные препараты с учетом результатов антибиотикограммы в стандартных дозировках в течение 5- 7 дней.

 
Перечень основных лекарственных средств: этиотропные средства отсутствуют.
 
Перечень дополнительных лекарственных средств:

№п/п Название МНН Доза Кратность Способ введения Продолжитель
ность лечения
УД
Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП)
1. Кетопрофен 150-300 мг 2-3 раза в сутки внутрь, во время еды 1-3 дня В
2. Диклофенак натрия 75-150 мг 2-3 раза в сутки внутрь, не разжевывая, во время или после еды 1-3 дня В
3. Ацетаминофен 500 мг 2-3 раза в сутки внутрь, после еды 1-3 дня В

Таблица сравнения препаратов: в клиническом аспекте отличие НПВС по выраженности основных эффектов и безопасности незначительное.
 
Хирургическое вмешательство: нет.
 

Дальнейшее ведение: ·          изоляция больных;

·          частое проветривание помещения, где находится больной;
·          влажная уборка в помещении;
·          специфическая профилактика не разработана.
 

Индикаторы эффективности лечения: ·          стойкая нормализация температуры тела;

·          регресс симптомов заболевания.  Лечение (стационар)

ТАКТИКА ЛЕЧЕНИЯ НА СТАЦИОНАРНОМ УРОВНЕ: в случае тяжелого течения заболевания, при развитии осложнений пациенты лечатся на стационарном уровне. Выбор тактики лечения осуществляется в соответствии с клинической формой болезни.
 

Немедикаментозное лечение: ·          Постельный режим – до нормализации температуры;

·          Диета: общий стол (№ 15),  обильное питье, молочно-растительная диета.
 

Медикаментозное лечениеЭтиотропная терапия не проводится.

Патогенетическая терапия:

Дезинтоксикационная терапия:
Инфузии физиологического раствора, 10% раствора декстрозы в/в в объеме 30-40 мл/кг в сутки под контролем глюкозы и натрия крови (при определении объема инфузии учитывать физиологические потребности, патологические потери);
При  развитии менингита/ менингоэнцефалита   зондовое питание (при отсутствии сознания), дезинтоксикационная терапия в режиме дегидратации  (менингит/менингонцефалит). Общий  объем  инфузии   30-40 мл/кг в сутки под контролем глюкозы и натрия крови (при определении объема инфузии учитывать физиологические потребности, патологические потери, ЦВД, диурез; соблюдать отрицательный баланс в первые 2 суток терапии);
Маннитол (15% раствор) 0,5-1,5 г/кг, с фуросемидом 20-80мг (УД – В).
 
Терапия осложненных форм (ИТШ, отек мозга, менингоэнцефалит, миокардит): см. клинические протоколы диагностики и лечения «Менингококковая инфекция» (2015), «Менингиты» (2016), «Энцефалиты» (2016), «Миокардиты» (2013), «Перикардиты» (2013), «Острый и подострый эндокардит (инфекционный эндокардит)» (2014).
 

Симптоматическая терапия: При лихорадке выше 38,5ºС один из ниже перечисленных препаратов (1-3 дня):

· ацетаминофен внутрь по 0,2 и 0,5 г, суппозитории ректальные 0,25; 0,3 и 0,5 г;
· диклофенак натрия, внутрь 50 мг 3 раза в день, внутримышечно 75 мг/3 мл или 75 мг/2 мл 1-2 раза в день
· кетопрофен – внутримышечно 50 мг/мл 2 раза в день, или100 мг/мл, 100 мг/2 мл 1 раз в день; внутрь капсула 50 мг 2 раза в день или внутрь таблетки100 мг, 150 мг
 
При герпангине — полоскание горла дезинфицирующими растворами (фурациллин).
При конъюнктивите — ципрофлоксацин 3 мгмл, 5 мл, глазные капли, сульфацетамид 30% — 20 мл, глазные капли.
 
При бактериальных осложнениях – макролиды или бета-лактамные антибактериальные препараты с учетом результатов антибиотикограммы в стандартных дозировках в течение 5- 7 дней.
 
Перечень основных лекарственных средств: этиотропные средства отсутствуют.
 

Перечень дополнительных лекарственных средств: · ацетаминофен, таблетки по 0,2 и 0,5 г, суппозитории ректальные 0,25; 0,3 и 0,5 г;

· диклофенак натрия, таблетки, драже 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 150 мг; мазь, гель; раствор для инъекций 75 мг/3 мл, 75 мг/2 мл;
 
Таблица сравнения препаратов: см. амбулаторный уровень.
 
Хирургическое вмешательство:  нет.
 

Дальнейшее ведение: Выписка производится  после полного клинического выздоровления и при отсутствии изменений.

Диспансерное наблюдение за переболевшими лицами проводится при менингеальной и паралитической формах в течение 1 года и более с осмотром невропатолога не менее 1 раз в квартал.
 

Индикаторы эффективности лечения: · стойкая нормализация температуры;

· отсутствие интоксикации;
· отсутствие или значительное уменьшение симптомов заболевания;
· санация СМЖ при менингите.
Госпитализация

ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ГОСПИТАЛИЗАЦИИ С УКАЗАНИЕМ ТИПА ГОСПИТАЛИЗАЦИИ

Показания для плановой госпитализации: нет.

Показания для экстренной госпитализации: ·          по клиническим показаниям: срежнетяжелое/тяжелое течение; развитие осложнений (отек-набухание головного мозга, ИТШ, гиповолемический шок и др.); беременные женщины до 30 недель гестации (после 30 недель показана госпитализация в перинатальный центр, в родильный дом);

·          по эпидемиологическим показаниям: невозможность изоляции пациента дома при легких формах, проживание в закрытых учреждениях; работники пищевых предприятий и лица, к ним приравненные.
Информация Источники и литература

  1. Протоколы заседаний Объединенной комиссии по качеству медицинских услуг МЗ РК, 2017
    1. 1) Лобзин Ю.В. Руководство по инфекционным болезням- Учебное пособие. — СПб.: 2000. — 226 с. 2) Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н.Д.Ющука, Ю.Я.Венгерова. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. — 1040 с. 3) Караков К.Г., Безроднова С.М., Шацкая Н.В. и др. Поражения при герпесвирусной и энтеровирусной инфекциях. — Ростов н/Д: Феникс, 2007. — 170 с. 4) Saeed M., Zaidi S., Naeem A. et al. Epidemiology and clinical findings associated with enteroviral acute flaccid paralysis in Pakistan // BMC Infect. Dis. — 2007. — Vol. 7. 5) «Клиника и лечение энтеровирусной инфекции у взрослых», К.И. Чуйкова, О.М. Гуляева, Г.М. Гиева и др. //Сборник по материалам научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной 85-летию кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского государственного медицинского университета (ноябрь 2009, г. Томск). 6) «Viral meningoencephalitis: a review of diagnostic methods and guidelines for management» I.Steiner , H.Budka, A.Chaudhuri et al. //European Journal of Neurology, 2010,17: P.999–1009 (doi:10.1111/j.1468-1331.2010.02970.x). 7) «Coxsackievirus A6 associated hand, foot and mouth disease in adults: Clinical presentation and review of the literature» Downing C, Ramirez-Fort MK, Doan HQ et al. //J Clin Virol. 2014 Aug;60(4):381-6 (doi: 10.1016/j.jcv.2014.04.023. Epub 2014 May 9). 8) «Clinical and epidemiological characteristics of adult hand, foot, and mouth disease in northern Zhejiang, China, May 2008 — November 2013» Yin XG, Yi HX, Shu J, Wang XJ, Wu XJ, Yu LH //BMC Infect Dis. 2014 May 10;14(1):251 (doi: 10.1186/1471-2334-14-251). 9) Tandon M., Gupta A., Singh P., Subathra GN. Unilateral hemorrhagic maculopathy: An uncommon manifestation of hand, foot, and mouth disease. // Indian. J.Ophthalmol., 2016. — 64(10). – P.772-774. 10) Holmes C.W., Koo S.S., Osman H., et al. Predominance of enterovirus B and echovirus 30 as cause of viral meningitis in a UK population. // J.Clin.Virol., 2016. – 81. – P.90-93. 11) Cordey S., Schibler M., L’Huillier AG., et al. Comparative analysis of viral shedding in pediatric and adult subjects with central nervous system-associated enterovirus infections from 2013 to 2015 in Switzerland. //J.Clin. Virol., 2017. — 89. – P.22-29. 12) Second J., Velter C., Calès S., et al. Clinicopathologic analysis of atypical hand, foot, and mouth disease in adult patients. // J.Am.Acad.Dermatol., 2017. — 76(4). – P.722-729. 13) MRI of Enterovirus 71 myelitis with monoplegia» Shen WC, Tsai C, Chiu H, Chow K. //Neuroradiology, 2000; 42: Р.124–127. 14) Zheng S., Ye H., Yan J., et al. Laboratory diagnosis and genetic analysis of a family clustering outbreak of aseptic meningitis due to echovirus 30. // Pathog.Glob.Health., 2016. — 110(6). – P.233-237. 15) Ward N.S., Hughes B.L., Mermel L.A. Enterovirus D68 Infection in an Adult. // Am.J.Crit.Care, 2016. — 25(2). – P.178-180. 16) Hwang J.H., Kim J.W., Hwang J.Y., et al., Coxsackievirus B infection is highly related with missed abortion in Korea. // Yonsei.Med.J., 2014. — 55(6). – P.1562-1567. 17) Wu T., Fan XP, Wang WY, Yuan TM. Enterovirus infections are associated with white matter damage in neonates. // J.Paediatr.Child.Health. – 2014. — 50(10). – P.817-822. 18) A Guide to Clinical Management and Public Health Response for Hand, Foot and Mouth Disease (HFMD) World Health Organization 2011, 65р

Информация

ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ АСПЕКТЫ ПРОТОКОЛА:

Список разработчиков протокола с указанием квалификационных данных: 1)      Кошерова Бахыт Нургалиевна – доктор медицинских наук, профессор, проректор по клинической работе и непрерывному профессиональному развитию РГП на ПХВ «Карагандинский государственный медицинский университет», главный внештатный инфекционист МЗ РК.

2)      Шопаева Гульжан Амангельдиевна – доктор медицинских наук, профессор РГП на ПХВ «Казахский национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова».
3)      Маукаева Сауле Боранбаевна – кандидат медицинских наук, доцент, РГП на ПХВ «Государственный медицинский университет города Семей».
4)       Юхневич Екатерина Александровна – и.о. доцента кафедры клинической фармакологии и доказательной медицины РГП на ПХВ «Карагандинский государственный медицинский университет», клинический фармаколог.
 
Указания на отсутствие  конфликта интересов: отсутствует.
 

Список рецензентов: 1)      Доскожаева Сауле Темирбулатовна  – доктор медицинских наук, профессор, АО «Казахский медицинский университет непрерывного образования», проректор по учебной работе, заведующая кафедрой инфекционных болезней с курсом детских инфекций.

2)      Кулжанова Шолпан Адлгазыевна – доктор медицинских наук, профессор, АО «Медицинский университет Астана», заведующая кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии.
 
Условия пересмотра протокола: пересмотр протокола через 5 лет после его опубликования и с даты его вступления в действие или при наличии новых методов с уровнем доказательности.

РЦРЗ МЗ РК проводит анкетирование врачей

методические рекомендации по лечению энтеровирусной инфекции

Республиканский центр развития здравоохранения МЗ РК приглашает казахстанских врачей пройти анкетирование.

Цель опроса: выяснить уровень удовлетворенности медицинского персонала в государственных и частных медицинских организациях. Сроки проведения анкетирования: 25 августа — 25 сентября 2018 года.

Заполнить анкету

Мобильное приложение «Doctor.kz»

методические рекомендации по лечению энтеровирусной инфекции

Ищете врача или клинику? «Doctor.kz» поможет!

Бесплатное мобильное приложение «Doctor.kz» поможет вам найти: где принимает нужный врач, где пройти обследование, где сдать анализы, где купить лекарства. Самая полная база клиник, специалистов и аптек по всем городам Казахстана.

Запишитесь на прием через приложение! Быстро и удобно в любое время дня.

Скачать: Google Play Market | AppStore

Прикреплённые файлы

РЦРЗ МЗ РК проводит анкетирование врачей

Цель опроса: выяснить уровень удовлетворенности медицинского персонала в медицинских учреждениях Казахстана.
Сроки проведения: 25 августа — 25 сентября 2018 года.

Заполнить анкету

Внимание! Если вы не являетесь медицинским специалистом:

  • Занимаясь самолечением, вы можете нанести непоправимый вред своему здоровью.  
  • Информация, размещенная на сайте MedElement, не может и не должна заменять очную консультацию врача. Обязательно обращайтесь в медицинские учреждения при наличии каких-либо заболеваний или беспокоящих вас симптомов.  
  • Выбор лекарственных средств и их дозировки, должен быть оговорен со специалистом. Только врач может назначить нужное лекарство и его дозировку с учетом заболевания и состояния организма больного.  
  • Сайт MedElement является исключительно информационно-справочным ресурсом. Информация, размещенная на данном сайте, не должна использоваться для самовольного изменения предписаний врача.  
  • Редакция MedElement не несет ответственности за какой-либо ущерб здоровью или материальный ущерб, возникший в результате использования данного сайта.

действует Редакция от 09.09.2006 Подробная информация

Наименование документ «ЭНТЕРОВИРУСНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ: КЛИНИКА, ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ПРОФИЛАКТИКА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.1.2130-06» (утв. Роспотребнадзором 09.09.2006)
Вид документа методические указания
Принявший орган роспотребнадзор
Номер документа МУ 3.1.1.2130-06
Дата принятия 01.01.1970
Дата редакции 09.09.2006
Дата регистрации в Минюсте 01.01.1970
Статус действует
Публикация
  • М., Роспотребнадзор, 2006
  • М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2006
  • «Бюллетень нормативных и методических документов госсанэпиднадзора», N 4, 2006
Навигатор Примечания

3. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА НЕПОЛИОМИЕЛИТНЫХ ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

В данном разделе изложены основные сведения по специфической лабораторной диагностике энтеровирусных инфекций. Много полезных сведений об основах специфической диагностики энтеровирусных инфекций можно получить дополнительно в изданных ранее справочных руководствах, например, в главе: «Энтеровирусы» в книге «Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных болезней» (под редакцией Э. Леннета и Н. Шмидт, Москва, «Медицина», 1974, с. 421 — 479), в «Руководстве по вирусологическим исследованиям полиомиелита», изданном ВОЗ на русском языке в 2005 году, а также в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита», изданными ВОЗ на русском языке в 2005 г.

3.1. Характеристика энтеровирусов

3.1.1. Классификация

Первоначально энтеровирусы были выделены в самостоятельную группу на основании физико-химических характеристик, таких как плавучая плотность (1,31 — 1,35 г/куб. см в хлористом цезии), коэффициент седиментации (от 150S до 165S), вес вириона (от 8 x 10(6) до 9 x 10(6) Da), отсутствие липидной оболочки, устойчивость к обработке эфиром и стабильность при pH от 3 до 10. Разделение энтеровирусов человека на четыре больших группы (вирусы полиомиелита, Коксаки A, Коксаки B, ЕСНО) было основано на их патогенности для лабораторных животных или способности вызывать цитопатический эффект в культуре клеток приматов (табл. 2). Идентификация серотипа основывалась на нейтрализации инфекционности вируса для животных или цитопатического действия вируса в культуре клеток специфическими антисыворотками (табл. 3).

Таблица 2

ЭНТЕРОВИРУСЫ ЧЕЛОВЕКА: ВОСПРИИМЧИВЫЕ ЖИВОТНЫЕ И КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК

Вирусы Цитологический эффект Заболевание или патология
клетки обезьян клетки человека новорожденные мыши обезьяны
Полиомиелита + + +
Коксаки A +/- +/- +
Коксаки B + + +
ЕСНО + +/-

Примечание. Имеется много штаммов энтеровирусов, которые имеют характеристики, свойственные одновременно разным группам энтеровирусов.

Таблица 3

НЕПОЛИОМИЕЛИТНЫЕ ЭНТЕРОВИРУСЫ ЧЕЛОВЕКА (ПРИНЯТАЯ РАНЕЕ КЛАССИФИКАЦИЯ)

Вирусы Относятся серотипы Всего серотипов
Коксаки A 1 — 22, 24 23
Коксаки B 1 — 6 6
ЕСНО 1 — 7, 9, 11 — 21, 24 — 27, 29 — 33 28
Пронумерованные 68 — 71, 73 — 78, 89 — 91 13

Примечания.

1. Не менее 20 серотипов энтеровирусов человека еще не классифицировано.

2. Вирус Коксаки A23 идентичен ранее описанному вирусу ЕСНО 9.

3. Вирус ЕСНО 8 идентичен ранее охарактеризованному вирусу ЕСНО 1.

4. Вирус ЕСНО 10 оказался реовирусом.

5. Вирусы ЕСНО 22 и ЕСНО 23 были выделены как род Parechovirus и его отдельные серотипы.

6. Вирус ЕСНО 28 оказался риновирусом.

7. Вирус ЕСНО 34 идентичен ранее охарактеризованному вирусу Коксаки A24.

8. Энтеровирус 72 является возбудителем гепатита A и выделен в отдельный род Hepatovirus в семействе Picornaviridae (см. табл. 4).

Согласно последней классификации вирусов (Международный комитет по таксономии вирусов, 2003), основанной на геномных характеристиках вирусов, неполиомиелитные энтеровирусы человека представлены 4 видами (A, B, C, D), входящими в род Enterovirus, который относится к семейству Picornaviridae (от pico — малый и rna — содержащий РНК) (табл. 4). К каждому из 4 видов отнесены различные серотипы неполиомиелитных энтеровирусов (табл. 5). Типовым представителем рода является вирус полиомиелита.

Таблица 4

СЕМЕЙСТВО PICORNAVIRIDAE, РОДЫ, ВИДЫ И ЧИСЛО ВХОДЯЩИХ В ВИДЫ СЕРОТИПОВ

Род и входящие в него виды Число серотипов
Род Enterovirus
Вирус полиомиелита 3
Энтеровирус человека A 16
Энтеровирус человека B 41
Энтеровирус человека C 11
Энтеровирус человека D 2
Обезьяний энтеровирус 20
Бычий энтеровирус 2
Свиной энтеровирус A 1
Свиной энтеровирус B 2
Род Hepatovirus
Вирус гепатита A (бывший энтеровирус человека 72) Вирус гепатита A обезьян 1
Род Rhinovirus
Риновирус человека A 18
Риновирус человека B 3
Неклассифицированные 82
Род Cardiovirus
Вирус энцефаломиокардита мышей 1
Вирус Тейлера мышей 2 или 3
Род Teschovirus
Вирус Тешенской болезни свиней 10
Род Aftovirus
Вирус ящура 7
Вирус ринита лошадей A 1
Род Parechovirus
Бывшие вирусы ЕСНО 22 и ЕСНО 23 3

Примечание. Приведенная в таблице классификация основана на геномных характеристиках вирусов. По-видимому, будут считаться отдельными родами еще несколько энтеровирусов животных. Большое число энтеровирусов (не менее 20) еще не классифицировано.

Таблица 5

ТАКСОНОМИЧЕСКИЕ ВИДЫ НЕПОЛИОМИЕЛИТНЫХ ЭНТЕРОВИРУСОВ ЧЕЛОВЕКА И ВХОДЯЩИЕ В ВИДЫ СЕРОТИПЫ

Вид Число серотипов Относятся серотипы
Энтеровирус человека A 16 Коксаки A 2 — 8, 10, 12, 14, 16 Энтеровирус 71, 76, 89 — 91
Энтеровирус человека B 41 Коксаки A9, Коксаки B1 — 6 ЕСНО 1 — 7, 9, 11 — 21, 24 — 27, 29 — 33 Энтеровирусы 69, 73 — 75, 77, 78
Энтеровирус человека C 11 Коксаки A1, 11, 13, 15, 17 — 22, 24
Энтеровирус человека D 2 Энтеровирусы 68 и 70

В настоящее время определена полностью или частично нуклеотидная последовательность геномов многих энтеровирусов. Все энтеровирусы оказались сходными по общей схеме организации геномов, хотя и имеют различия по видам и серотипам.

3.1.2. Влияние химических и физических агентов

Энтеровирусы вне организма нечувствительны к воздействию всех известных антибиотиков и химиотерапевтических препаратов. Эфир, дезоксихолат и различные детергенты, разрушающие арбовирусы, миксовирусы и ряд других вирусов, не оказывают влияния на энтеровирусы. Энтеровирусы устойчивы в кислой среде (pH 3 — 5). Обработка 0,3%-м формальдегидом, 0,1 N HCl или свободным остаточным хлором в концентрации 0,3 — 0,5 мг/л ведет к быстрой инактивации энтеровирусов, однако присутствие органических веществ может оказывать защитное действие.

При 50 °C энтеровирусы быстро разрушаются. Добавление к вирусной взвеси хлористого магния в одномолярной концентрации сохраняет титр вируса при 50 °C практически неизменным в течение часа.

В замороженном состоянии активность энтеровирусов сохраняется в течение многих лет, при хранении в обычном холодильнике (4 — 6 °C) — в течение нескольких недель, а при комнатной температуре — на протяжении нескольких дней.

Энтеровирусы быстро разрушаются под воздействием ультрафиолетового облучения или при высушивании. Они выдерживают многократное замораживание и оттаивание без потери активности.

3.2. Роль лабораторных вирусологических исследований в постановке диагноза энтеровирусной инфекции

Для бесспорного признания вируса этиологическим агентом в обследуемом случае заболевания не всегда достаточно выделить вирус и продемонстрировать появление специфических антител. Особенно это касается этиологии спорадических случаев или первых случаев во время вспышек заболеваний, этиология которых на первых порах была неясной. Интерпретация лабораторных данных в указанных случаях требует особенной осторожности.

Для признания определенного вируса этиологическим фактором заболевания сбор и анализ доказательств должны быть многосторонними.

Клиническая картина изучаемого заболевания с неясной этиологией должна быть очерчена по физическим, лабораторным, патологоанатомическим данным.

Должны быть изучены эпидемиологические характеристики заболевания (источник инфекции, пути передачи, возраст заболевших, социальные, географические условия, сезонность и т.п.) в пользу его своеобразия.

Должны быть представлены данные в пользу вирусной этиологии болезни (т.е. данные, исключающие роль других микроорганизмов и неинфекционных причин).

От больного должен быть выделен предполагаемый вирусный агент или выявлены его нуклеотидные последовательности, а также установлена его таксономическая принадлежность.

Следует показать, что вирус не случайно присутствовал в организме пациента и не является контаминантом, полученным от использованных для выделения вируса животных или культур клеток.

Должны быть показаны сероконверсия или другие признаки иммунитета после перенесенного заболевания.

Заболевание должно быть воспроизведено при введении выделенного агента животным и изучены характеристики вызванного заболевания.

Вакцина или иммунная сыворотка должны предохранять от заболевания. Следует учитывать влияние на болезнь и других воздействий (например, интерференции с вакцинным вирусом полиомиелита у детей с энтеровирусной инфекцией).

Желательно, чтобы результаты этиологического изучения болезни были подтверждены другими исследователями.

Энтеровирусы очень часто вызывают бессимптомную инфекцию; доказаны случаи одновременной инфекции двумя, тремя и даже четырьмя энтеровирусами. Некоторые энтеровирусы (полиомиелита, Коксаки A7, A9, A16, A21 и другие, вирусы ЕСНО типов 4, 6, 9, 11, 16, 19, 30 и другие, энтеровирус типа 71) обнаруживаются периодически в качестве этиологических агентов эпидемических вспышек, и их патогенность для человека хорошо доказана. Однако эти же энтеровирусы часто выделяют от здоровых людей или на фоне очень легкого недомогания. Поэтому простое выделение вируса еще не является безоговорочным доказательством этиологической роли этого агента при заболевании и может быть случайным совпадением. Выделение энтеровируса из пищеварительного тракта даже при 4-кратном нарастании титра антител к этому вирусу может не иметь отношения к этиологии обследуемого случая заболевания. Вместе с тем, регулярное выделение энтеровируса одного типа от сходных случаев заболеваний и от клинически здоровых лиц из окружения больных в совокупности с гомотипичной иммунологической реакцией является веским доказательством этиологической роли соответствующего агента.

Выделение предполагаемого энтеровируса из стерильных жидкостей организма (СМЖ, крови и др.) или из тканей (центральной нервной системы, сердечной мышцы и др.), обнаружение характерных патологоанатомических признаков, обнаружение вирусного антигена (или геномных последовательностей вируса) в пораженных клетках рассматривают как убедительные доказательства этиологической связи выявленного агента с обследуемым заболеванием. Выделение одного и того же типа вируса от больных со сходными клиническими симптомами во время вспышки, особенно если оно подкрепляется результатами серологических исследований, указывает на этиологическую роль вируса этого типа. Для признания этиологической роли энтеровируса при изучении вновь возникающих заболеваний (например, вируса Коксаки A7 и энтеровируса типа 71 при вспышках полиомиелитоподобного заболевания, вирусов ЕСНО 19 и ЕСНО 11 при вспышках острого энтеровирусного увеита), помимо комплекса данных, полученных в одной лаборатории, чрезвычайно ценным является получение сходных эпидемиологических и лабораторных данных в других лабораториях, других районах и в другие годы.

3.3. Методы лабораторной вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций

3.3.1. Безопасность работы в лаборатории, выполняющей диагностические исследования энтеровирусных инфекций

Согласно российским официальным нормативным документам, неполиомиелитные энтеровирусы отнесены к IV группе патогенности («Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности». СП 1.2.036-95). Правила устройства микробиологических лабораторий, получения разрешений на работу с микроорганизмами и безопасности работы регламентируются СП 1.2.006-93 и СП 1.2.731-99.

Выполнение диагностических исследований энтеровирусных инфекций допускается в лабораториях, организациях, структурных подразделениях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение и лицензию на выполнение работ с микроорганизмами III — IV групп патогенности.

Организация работы в лаборатории выполняется в соответствии с СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами».

: В связи с утратой силы СП 1.2.731-99, следует руководствоваться принятыми взамен СП 1.3.2322-08.

Клинические материалы, которые используются для диагностических исследований энтеровирусных инфекций, могут быть инфицированы диким полиовирусом, поэтому при работе с ними необходимо соблюдать правила, изложенные в следующих нормативных документах:

— СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования материалов, инфицированных или потенциально инфицированных диким полиовирусом»;

: Официальный источник электронного документа содержит неточность: СП 1.2.036-95 имеет название «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности».

— СП 1.3.1325-03 «Безопасность работы с материалами, инфицированными или потенциально инфицированными диким полиовирусом».

Основные рекомендации по работе лабораторий, выполняющих диагностические исследования энтеровирусных инфекций, содержатся в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005) и в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005).

Среди лиц, работающих с энтеровирусами, точно документированные случаи лабораторных заражений являются редкими. Это — или следствие несчастного случая, или несоблюдение соответствующих предосторожностей. Известен случай заноса дикого вируса полиомиелита в семью работником производства полиовирусной вакцины. Хорошее владение техникой работы и употребление различных защитных приспособлений значительно снижают этот риск. Наиболее частой причиной лабораторных заражений является вдыхание аэрозолей вируссодержащих материалов, образующихся при работе с пипетками, шприцами, при центрифугировании, а также контакт с зараженными животными.

Работников, осуществляющих работу с инфекционными материалами, нужно инструктировать о необходимости обращения к врачу в случае заболевания лихорадочного типа. Следует периодически брать пробы крови у персонала и хранить сыворотки в замороженном виде для серологических исследований в случае заболевания. Для каждой лаборатории в соответствии с конкретными условиями работы следует разработать руководство по технике безопасности. Основное внимание следует уделять необходимости сознательного и ответственного отношения к работе со стороны персонала, а также тщательному обучению правилам безопасности новых сотрудников, поскольку само по себе существование правил безопасности и защитных приспособлений еще не обеспечивает предупреждения лабораторных заражений.

Санитарными правилами СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами» определяются требования к организации работы, включая требования к помещениям и оборудованию лабораторий, проведению работ в лаборатории, средствам индивидуальной защиты, содержанию животных, обеззараживанию материала и уборке помещений, мероприятиям по ликвидации аварий и организации контроля за выполнением требований биологической безопасности. В этих санитарных правилах предписаны режимы обеззараживания различных зараженных материалов (поверхностей рабочих столов, стен и полов помещений, защитной одежды, лабораторной посуды и вируссодержащих материалов, инструментов). В этих правилах предписываются также режимы дезинфекции предметов, которые могут быть контаминированы выделениями больных людей (одежда, обувь, белье, посуда, жидкие отходы, посуда из-под выделений, санитарно-техническое оборудование, уборочный материал, мусор, транспорт). Рекомендуются также средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности и бактериологический метод контроля эффективности работы парового стерилизатора.

3.3.2. Правила забора и транспортирования материалов от больных для проведения вирусологических исследований

Для подтверждения вирусной этиологии заболевания необходимо проведение лабораторного исследования, эффективность которого зависит от правильного сбора соответствующих материалов (тканей, фекалий, носоглоточных смывов, крови, везикулярной жидкости, спинно-мозговой жидкости) и транспортирования их в лабораторию. Все пробы для выделения вируса необходимо брать с соблюдением соответствующих предосторожностей для исключения контаминации одной пробы материалом другой пробы этого же больного или материалом пробы другого обследуемого. Для успешного лабораторного исследования необходимо производить как можно более ранний отбор проб.

Забор материалов осуществляется медицинскими работниками лечебно-профилактического учреждения, куда госпитализирован больной. Для отбора проб используют стерильную стеклянную или пластиковую посуду.

Две пробы фекалий для выделения вируса отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней, с интервалом 24 — 48 ч.

Носоглоточные/глоточные смывы отбирают в первые 3 — 4 дня от начала заболевания. Для получения носоглоточного/глоточного смыва можно использовать стерильную дистиллированную воду, бульон или солевой раствор. Отбор материала с помощью глоточного тампона производят в те же сроки. Тампоном протирают заднюю стенку глотки, миндалин и небных дужек. Тампоны помещают в пробирку с 1 — 2 мл раствора Хэнкса; пробу исследуют сразу или хранят в замороженном виде.

Спинно-мозговую жидкость берут в первые дни болезни в асептических условиях стерильным шприцем только по клиническим показаниям.

Пробы крови для серологической диагностики следует брать утром натощак. На всех этапах взятия и обработки крови принимают меры для предотвращения гемолиза. Первую пробу крови (5 мл) берут как можно раньше после начала болезни, вторую — на 3 — 4-й неделе, в стадии реконвалесценции. Параллельно кровь исследуют на выделение вируса — возбудителя болезни.

В случае летального исхода для исследования проводят забор секционного материала (ткани головного, спинного и продолговатого мозга и варолиева моста, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки). При необходимости исследованию подвергают и другие материалы — ткань сердечной мышцы, печени, легких, селезенки, почек, лимфатических узлов, глаза и т.д. Пробу нужно брать как можно раньше после смерти. Ткани берут в заранее намеченном порядке, чтобы избежать их контаминации содержимым желудка и кишечника. Для иссечения тканей пользуются стерильными инструментами (отдельный набор для каждой пробы). Объем каждой пробы (кусочка) из тканей центральной нервной системы должен составлять примерно 1 куб, см; из толстой кишки иссекается сегмент длиной 3 — 5 см, содержащий фекальные массы.

Собранные пробы немедленно отправляют в лабораторию. Все пробы, кроме фекалий, спинно-мозговой жидкости и крови, сразу же после взятия помещают в транспортировочную среду. Если отправка проб задерживается, их помещают в холодильник при температуре 4 — 8 °C. Если время до отправки превышает 24 ч, пробы замораживают при температуре -20° или ниже. Следует сохранять их замороженными до получения лабораторией. Сыворотки без добавления консервантов хранят в замороженном виде. Повторное замораживание и оттаивание сывороток (больше 4 раз) может оказывать неблагоприятное влияние на титр антител.

Пробы помещают в пластиковые мешки так, чтобы избежать протечек и повреждений. Все материалы должны сопровождаться соответствующими документами — направлением на исследование с указанием наименования учреждения, адреса, телефона, адреса электронной почты, факса и сопроводительными документами, содержащими основные сведения о больном.

Транспортирование проб осуществляют с соблюдением условий «холодовой цепи» в термоконтейнерах или термосах, обеспечивающих эти условия. При транспортировании проб руководствуются санитарными правилами «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности. СП 1.2.036-95».

При отборе, хранении и транспортировании проб руководствуются основными методическими документами:

— «Рекомендации по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005);

— «Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005).

3.3.3. Выделение энтеровирусов

Основными методами лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции являются выделение вируса (в культуре клеток или на животных) и обнаружение РНК энтеровирусов с помощью ПЦР. Выделение вируса хотя и требует большего времени, дает наиболее однозначный ответ на вопрос об этиологии заболевания и позволяет использовать выделенный вирус для последующих эпидемиологических исследований. ПЦР обладает большей чувствительностью, большей быстротой и позволяет выявлять вирусы, не размножающиеся в культуре клеток. ПЦР используют при исследовании спинно-мозговой жидкости и материалов из верхних дыхательных путей.

3.3.3.1. Культуры клеток

Универсальной культуры клеток (или культуральной системы), пригодной для выделения всех энтеровирусов, не существует. Некоторые штаммы энтеровирусов не обладают цитопатогенностью ни для одной из известных культур клеток и могут быть выделены только с использованием чувствительных лабораторных животных, что достаточно сложно в условиях практической лаборатории. Обобщенные сведения о чувствительности наиболее распространенных в лабораториях перевиваемых культур клеток к различным энтеровирусам представлены в табл. 6.

Таблица 6

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК К РАЗЛИЧНЫМ ЭНТЕРОВИРУСАМ

Вирусы Проявление цитопатического эффекта на культуре клеток
RD HEp-2 L20B BGM
Полиомиелита 1 — 3 + + + +
ЕСНО + +/-
Коксаки A +/-за исключением неразмножающихся A1, A19, A22 (Коксаки A 2 — 6, 8, 10, 14)
Коксаки B + +
Энтеровирусы 68 — 71 +/-

Для увеличения вероятности выделения энтеровируса из исследуемого материала целесообразно использовать не менее двух видов культур клеток, одной из которых должна быть культура клеток RD.

Эффективность исследования материала зависит от состояния клеточных культур: клетки должны сохранять высокую чувствительность к энтеровирусам, аутентичность, стабильность и быть свободными от загрязнения микроорганизмами (простейшими, бактериями, грибами, дрожжами, микоплазмами, вирусами).

Культуры клеток должны быть получены из аттестованного официального источника. Подробные рекомендации по работе с культурами клеток изложены в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005).

3.3.3.2. Подготовка проб для исследования в культуре клеток

Пробы фекалий. Готовят 10 — 20%-ю суспензию фекалий в сбалансированном солевом растворе (ФСБ) с антибиотиками. Пробы обрабатывают хлороформом, к действию которого устойчивы энтеровирусы. Такая обработка позволяет избавиться от бактериального и грибкового загрязнения пробы, удаляет потенциально токсичные липиды, способствует диссоциации вирусных агрегатов.

В маркированную центрифужную пробирку последовательно добавляют 10 мл ФСБ с антибиотиками, 1 г стеклянных бус и 1 мл хлороформа. Вносят примерно 2 г фекальной пробы, плотно закрывают пробирку и интенсивно встряхивают в течение 20 мин. Центрифугируют с охлаждением в течение 20 мин. при 1500 g. Надосадочную жидкость отбирают для исследования. (Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита. 4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005.)

Тампоны. Тампоны встряхивают в транспортировочной среде для высвобождения клеточного материала, избегая образования аэрозолей. Полученную суспензию обрабатывают хлороформом, как описано выше.

Спинно-мозговая жидкость. Пробы спинно-мозговой жидкости используют для исследования без дополнительной обработки. Если проба мутная, ее осветляют центрифугированием при 1600 — 2000 g в течение 10 мин.

Тканевые пробы. Готовят 10 — 20%-ю тканевую суспензию. Для этого ткани растирают в стерильной ступке, добавляя при необходимости стерильный песок и небольшое количество транспортировочной среды. Суспензию осветляют центрифугированием при 1600 — 2000 g в течение 10 мин.

3.3.3.3. Выделение и идентификация вирусов на культуре клеток

При выделении энтеровирусов с помощью чувствительных культур клеток следует руководствоваться принципами, изложенными в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005), «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005), МУ 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов» (Москва, 2006).

Энтеровирусы обычно идентифицируют в реакциях нейтрализации инфекционности, связывания комплемента, преципитации, иммунофлюоресценции или подавления гемагглютинации. Проведение всех этих реакций возможно лишь при наличии диагностических типоспецифических иммунных сывороток высокого титра. Наиболее чувствительным, специфичным и распространенным способом идентификации является реакция нейтрализации инфекционности.

В основе реакции нейтрализации инфекционности лежит взаимодействие исследуемого вируса с гомологичной сывороткой (или смесью антисывороток), которая нейтрализует вирус, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток. В опыте по нейтрализации вирусную суспензию, содержащую 100 ТЦД_50, смешивают в равном объеме с диагностическими сыворотками. После инкубации в течение 1 — 2 ч при 37 °C смесь вводят в культуры клеток. Иммунная сыворотка, которая предотвращает развитие ЦПЭ, указывает на тип вируса.

При постановке реакции нейтрализации для идентификации выделенного агента руководствуются вышеуказанными методическими документами.

3.3.4. Серологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

В сыворотке пациента можно обнаружить специфические антитела (нейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, подавляющие гемагглютинацию). Диагностика отдельных случаев заболевания только серологическими методами требует большого количества исследований со всеми известными серотипами энтеровирусов, поэтому ее предпринимают только при наличии данных, позволяющих предполагать тип этиологического агента (характерной клинической картины болезни, выделения и идентификации энтеровируса от больного, наличия вспышки заболеваний, вызванных установленным типом вируса).

Определение антител проводят с диагностической целью или при изучении эпидемиологических аспектов инфекции.

Для диагностических целей необходимы, по крайней мере, две пробы сыворотки, первую из которых берут как можно раньше после начала болезни, а вторую — через 2 — 3 недели после первой. Диагноз инфекции подтверждается значительным подъемом титра специфических антител во второй пробе. Диагностически значимым считают 4-кратный и больший подъем титра антител.

Для эпидемиологических исследований достаточно одной пробы сыворотки от каждого обследуемого; внимание следует обращать на правильный отбор обследуемых лиц и компоновку групп, чтобы получить наиболее представительные результаты.

В настоящее время для серологической диагностики используют преимущественно реакцию нейтрализации инфекционности. Другие методы выявления антител (реакцию связывания комплемента, преципитацию в агаре, подавление гемагглютинации) используют редко. В основе определения титров антител с помощью реакции нейтрализации лежит принцип взаимодействия известного вируса с гомологичными антителами, присутствующими в сыворотке, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток.

Разведения сыворотки (двукратные или пятикратные до, приблизительно, 1:2500) смешивают с равными объемами разведения вируса, содержащего 100 ТЦД_50, в том объеме смеси, который будет введен в культуру при заражении. Смесь выдерживают 2 ч при 37 °C и вносят в 2 — 3 пробирки или лунки с культурой клеток. Контроль должны включать: а) наименьшее (1:4) разведение сыворотки для проверки токсичности; б) контроль качества клеток со средой; в) титрование рабочей дозы вируса. Титром сыворотки считают наибольшее разведение, защищающее 50% зараженных культур от действия 100 ТЦД_50 вируса.

3.3.5. Молекулярно-биологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

Основные сведения об использовании молекулярно-биологических методов для индикации и идентификации энтеровирусов изложены в Методических указаниях 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов».

Разработанные в последние годы молекулярно-биологические методы индикации и типирования энтеровирусов позволяют выявить наличие энтеровирусных геномных последовательностей в исследуемом материале уже через несколько часов после начала работы и установить их типовую принадлежность в большинстве случаев уже через 2 — 3 дня.

Обязательным условием для получения достоверных результатов при проведении молекулярно-биологической диагностики является наличие квалифицированного персонала.

Набор помещений и оборудования (ОТ-ПЦР, электрофорез), организация работы должны исключать возможность случайной контаминации исследуемых проб.

Главное преимущество молекулярно-биологических методов — быстрота и достоверность выявления и типирования возбудителей. Это создает возможность раннего этиологического диагноза и экономию на средствах лечения и длительности пребывания в стационаре (например, при снятии диагноза бактериального менингита или сепсиса). При быстрой постановке этиологического диагноза возможно проведение быстрой специфической профилактики (например, введение гамма-глобулина при вспышках энтеровирусного менингита или увеита).

Главным недостатком традиционных методов выделения и типирования энтеровирусов является их длительность.

Быстрота и специфичность определения принадлежности возбудителя могут иметь исключительно важное значение при изучении вспышек заболеваний («молекулярная эпидемиология»). Создается надежная основа для быстрого и точного установления источников инфекции, времени и путей распространения возбудителя, влияния бытовых условий, соблюдения режимов санитарии в больницах, эффективности проведения профилактических мероприятий.

Наиболее часто ОТ-ПЦР используют для диагноза энтеровирусной инфекции путем прямого выявления последовательностей геномной РНК вируса в клинических пробах. Имеется множество модификаций методики, но все методы, способные установить родовые последовательности энтеровирусов, имеют несколько общих узловых характеристик. Наиболее важной из них является использование праймеров для 5′ нетранслируемой области вирусного генома. Опубликованы последовательности многих праймеров, специфичных для различных последовательностей этого региона у разных групп энтеровирусов. Однако значительная часть праймеров не проверена на достаточно большом числе штаммов, выделенных из клинических материалов, чтобы проконтролировать их реактивность со всеми серотипами и штаммами и поэтому не оценена достаточно хорошо для использования в диагностике. Главным преимуществом панэнтеровирусной ОТ-ПЦР является быстрое выявление энтеровируса даже с малым количеством исследуемого материала (как, например, СМЖ) и вирусов, которые не размножаются в культурах клеток. Главным недостатком ОТ-ПЦР-диагностики является вариабельность результатов, зависящая главным образом от природы исследуемой пробы. Хотя в некоторых случаях ОТ-ПЦР способна уловить единичные копии вирусной РНК, иногда ее чувствительность оказывается намного ниже, например, при исследовании проб кала (но все же не ниже чувствительности культур клеток).

Молекулярное типирование энтеровирусов основано на ОТ-ПЦР и определении нуклеотидной последовательности в области генома, кодирующей белок капсида VP1. Серотип исследуемого изолята определяют сравнением полученных последовательностей с имеющимися в генном банке последовательностями прототипных энтеровирусов человека. Этот метод несоизмеримо ускоряет типирование и может быть использован для идентификации изолятов, которые трудно или невозможно типировать, используя обычные иммунологические и вирусологические методы. Метод особенно полезен для оценки родства штаммов во время вспышек.