Микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Содержание

ссылки

Энтеровирусы

Семейство пикорнавирусов (pico — маленький, RNA — РНК) включает в себя наиболее просто организованные вирусы, многие из которых патогенны для человека. Они относятся к четырем родам (Enterovirus, Rinovirus, Cardiovirus, Aphtovirus), имеющим ряд общих признаков: мелкие размеры (около 28 нм), положительный РНК-содержащий геном, который функционирует в качестве иРНК и обладает инфекционными свойствами, отсутствием внешней оболочки, кубическим типом симметрии капсида и сходными механизмами репродукции. В основе дифференциации родов лежат антигенные различия, неодинаковая чувствительность к низким значениям рН, разная патогенность для человека и некоторые другие признаки. Энтеровирусы вызывают у людей нейроинфекции и заболевания различных органов и тканей. Кардиовирусы и афтовирусы патогенны преимущественно для животных. К афтовирусам относится вирус ящура. Патогенными для человека являются вирусы полиомиелита, Коксаки группы А и В, ECHO, энтеровирусы серотипов 68-72 и вирус гепатита А. Полагают, что энтеровирусы весьма интенсивно эволюционируют, о чем свидетельствует формирование новых типов возбудителей с необычной локализацией в организме. Например, энтеровирус серотипа 70 поражает конъюнктиву глаза, вызывая острый геморрагический конъюнктивит. Все энтеровирусы близки между собой по своей структуре, химическому составу, резистентности к физическим и химическим факторам и другим свойствам. Наиболее изученным из них является вирус полиомиелита.

Энтеровирусная инфекция

Энтеровирусы человека входят в семью Picornaviridae, которая насчитывает более 70 представителей: 3 серотипа полиовируса, 29 серотипов вирусов Коксаки, 32 серотипа вирусов ECHO и 4 энтеровирусы 68-71-го серотипов. Сюда отнесены также и вирус гепатита А, который часто называют энтеровирусом 72-го серотипа. Для

лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций используют вирусологические, серологические и экспресс-методы. В последнее время резко снизилась заболеваемость полиомиелитом и выросло количество полиомиелитоподибних заболеваний, которые вызывают вирусы Коксаки, ECHO. Итак, вирусологические исследования необходимо проводить одновременно на выявление всех энтеровирусов.

Материал для исследования

Материалом для исследования служат испражнения больных в течение первой недели, смывы из носоглотки не позднее третьего дня, кровь, ликвор, моча не позднее пятого дня, сыворотка крови в первый и 14 дня; в случае смерти — кусочки мозга, внутренних органов, лимфоузлы. Стул берут в пенициллиновые флаконы, эмульгируют в растворе Хэнкса, центрифугируют и добавляют эфир и антибиотики. Смывы из носоглотки получают путем двукратного полоскания горла стерильным физиологическим раствором хлорида натрия, освещают центрифугированием и обрабатывают эфиром и антибиотиками. Среднюю порцию мочи (10 мл) также обрабатывают пенициллином и стрептомицином. Кровь и ликвор используют для вирусологических исследований без предварительной обработки. Секционный материал эмульгируют в стерильных ступках с песком, готовят 20% суспензию в растворе Хэнкса, центрифугируют и добавляют антибиотики

Вирусологические исследования

Выделение и идентификация энтеровирусов является основным методом лабораторной диагностики. Для этого используют различные культуры клеток и лабораторных животных. Обработанный, как выше указано, клинический материал инокуляцию в 2-3 вида перевиваемых и первичных культур клеток. Например, для выделения всех 3-охтипив вируса полиомиелита используют первичные культуры клеток почек обезьян и перевиваемых клетки HeLa, Vero, Нед-2. Вирусы Коксаки В, ECHO успешно выделяют в клетках почечного эпителия обезьян и на многих клетках человеческого происхождения (RH, HeLa, Нер-2 и другие). Выделение вирусов Коксаки А осуществляется на культуре клеток RD. При размножении энтеровирусов в культуре клеток микроскопически обнаруживают цитопатическое действие. Инфицированные клетки сморщиваются, становятся маленькими, круглыми, в их ядрах возникает пикноз. Позже клетки полностью разрушаются и отпадают от стенки флакона. Такие изменения вызывает вирус полиомиелита, большинство серотипов вирусов Коксаки В, ECHO, некоторые серотипы вирусов Коксаки А. В клетках амниона человека, эпителия почек, диплоидных клетках W1-3 8 и RD хорошо репродуцируются вирусы Коксаки А и отдельные серотипы вирусов ECHO. Вирусы Коксаки А и В успешно выделяют из исследуемого материала путем заражения однодневных мышей-сосунков в мозг (0,01 мл), под кожу (0,03 мл) в брюшную полость (0,05 мл). По инфицированными мышами ведут наблюдение в течение 14 дней. При наличии в материале вирусов Коксаки А на 2-5 день у животных появляются возбуждение, тремор, парезы и параличи мышц спины и конечностей. При Коксаки В-инфекции на 4-9 день у новорожденных мышей возникают спастические параличи. Из тканей и органов животных, погибших, готовят вирусвмистку суспензию для дальнейших исследований. При гистологическом исследовании обнаруживают дегенератини изменения в ЦНС, печени, поджелудочной железе и миокарде. Индикацию энтеровирусов проводят также по цитопатическим действием в культуре клеток или бляшкоутворення под агаровым или бентонитовых покрытием, а также за развитием паралича и гибелью животных. Для их идентификации используют иммуноферментный анализ, реакцию торможения гемагглютинации, иммунофлюоресценции и РСК. Реакцию нейтрализации на модели клеток проводят как выше описано. Необходимо учитывать, что при массовой иммунизации детей живой полиомиелитной вакциной возможно выделение вакцинных штаммов. Следовательно, необходимо устанавливать происхождение выделенных вирусов. Обнаружение энтеровирусов и определение видов и серотипов эффективно и скорее можно провести с помощью полимеразной цепной реакции. Серологические исследования. Методом парных сывороток ставят цветную пробу, реакцию нейтрализации с угнетением цитопатического действия, бляшкоутворення, РСК, РНГА с эритроцитарных диагностикумами. Цветную реакцию ранее часто ставили при серологической диагностике полиомиелита. Она базируется на способности вируса подавлять обменные процессы в инфицированных культурах клеток в результате чего сохраняется исходный цвет среды (малиновый). Антитела сыворотки крови больных нейтрализующих вирус и метаболизм клеток продолжается. Это приводит к накоплению кислых продуктов в системе, которые изменяют рН среды и оно приобретает желтый цвет. Приводим схему постановки цветной реакции при серологической диагностике полиомиелита. Результаты реакции учитывают визуально на 5-7 сутки путем сравнения цвета среды в опытных и контрольных пробирках. Титром сыворотки считают ее наибольшее разведение, при котором произошло нейтрализация вируса (последняя пробирка с культурой клеток, где среда желтого цвета). Диагностическое значение имеет нарастание титра антител во второй сыворотке не менее, чем в 4 раза по сравнению с первой сывороткой.

Экспресс-методы

Экспресс-методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций не нашли широкого применения из-за особенностей их патогенеза. Возможно использование реакции непрямой гемагглютинации с эритроцитарным полиовирусним диагностикумом и непрямой реакции иммунофлюоресценции. Для постановки последней используют иммунную диагностическую антивидовой сыворотку, истощенную гомологичными клетками крови, амниона, «фибробластами. Такая сыворотка реагирует только с вирусным антигеном, что находится внутри клеток изучаемого материала. В последнее время для экспресс-диагностики используют кариологичний анализ, основанный на выявлении характерных изменений в структуре ядер клеток клинического материала, взятого в первые дни заболевания. Микроскопируют мазки из осадка после центрифугирования смывов из носоглотки и мочи и мазки-отпечатки из органов, взятых при аутопсии. фиксирующие в холодном ацетоне, окрашивают гематоксилином. Специфическим для энтеровирусных инфекций является выявление в препаратах смещение хроматина к периферии ядра и образование ярко-фиолетовых телец, напоминающие полумесяц. Это позволяет дать предварительный ответ о репродукцию энтеровирусов в исследуемом материале. Дифференциацию данных и атенуйованих полиовирусних штаммов осуществляют с помощью ПЦР, ИФА, РН с моноклональными антителами. Для полиовирусов I типа используется бентонитовые тест (вирулентные полиовирусы имеют характеристики Ал -, а авирулентный — +).

Инфекционисты в Москве

Герасимова Наталия Леонидовна

Цена приема: 1500 1350 руб.

Записаться на прием со скидкой 150 руб. Нажимая на «Записаться на прием», Вы принимаете условия пользовательского соглашения и даете свое согласие на обработку персональных данных. Овчинникова Наталья Ивановна

Цена приема: 3500 1750 руб.

Записаться на прием со скидкой 1750 руб. Нажимая на «Записаться на прием», Вы принимаете условия пользовательского соглашения и даете свое согласие на обработку персональных данных. Агринская Ольга Владимировна

Цена приема: 3500 1750 руб.

Записаться на прием со скидкой 1750 руб. Нажимая на «Записаться на прием», Вы принимаете условия пользовательского соглашения и даете свое согласие на обработку персональных данных. Инфекционисты в Москве

К энтеровирусным инфекциям относят группу инфекционных заболеваний, возникающих вследствие попадания в организм кишечных вирусов. Они могут проявляться в виде самой разнообразной клинической картины из-за поражения сердечно-сосудистой и нервной систем, мышечной ткани, печени, ЖКТ, почек, органов дыхания или других органов. В большинстве случаев энтеровирусная инфекция у детей протекает в легкой форме и сопровождается такими симптомами, как резкое повышение температуры, общее недомогание, высыпания на коже и слизистых, расстройства со стороны ЖКТ.

Содержание:

  • Характеристика возбудителя
  • Пути заражения
  • Формы и симптомы заболевания
  • Герпетическая ангина
  • Серозный менингит
  • Энтеровирусная экзантема
  • Эпидемическая миалгия

Диагностика Лечение Осложнения Профилактика микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Характеристика возбудителя

Возбудителем энтеровирусной инфекции являются вирусы рода Enterovirus, из семейства Picornaviridae. Они состоят из линейной однонитевой молекулы РНК, заключенной во внешнюю оболочку белковой природы. Все энтеровирусы содержат в составе общий антиген, характерный для всего рода, и специфический антиген, типичный только для конкретного вида (серотипа). Патогенными для организма человека считаются порядка 70 видов энтеровирусов, которые разделяют на следующие группы:

  • вирусы полиомиелита (3 серотипа);
  • вирусы Коксаки типа А (включает 24 серотипа) и типа В (включает 6 серотипов);
  • вирусы ЕСНО (34 серотипа);
  • неклассифицированные энтеровирусы.

Энтеровирусы распространены повсеместно. В условиях внешней среды они могут сохранять жизнеспособность до одного месяца, а в испражнениях – до 6 месяцев. Их можно обнаружить в почве, воде, продуктах питания. Они устойчивы к низким температурам, даже к заморозке, кислым средам, воздействию 70%-ного этилового спирта, диэтилового эфира, фенольных соединений, однако быстро инактивируются при высушивании, нагревании до 50°С и более, воздействии ультрафиолетового облучения, ультразвука, радиации. Также они теряют жизнеспособность при обработке хлорсодержащими дезинфицирующими средствами, окислителями (перекись водорода, перманганат калия), метиленовым синим, формальдегидом.

Основным местом репродукции энтеровирусов в организме человека являются лимфоидные структуры тонкого кишечника, клетки эпителия и лимфоидной ткани глоточного кольца. После перенесенной энтеровирусной инфекции у ребенка остается стойкий пожизненный иммунитет, но только к тому типу вируса, с которым у организма был контакт, и по отношению к другим серотипам он оказывается неэффективным и бесполезным.

Пути заражения

Энтеровирусные инфекции чаще всего регистрируются летом и осенью. Наиболее подвержены заболеванию дети младшего возраста до 10 лет. Дети старшего возраста и взрослые болеют реже, так как уже имеют сформированный иммунитет к возбудителю вследствие бессимптомно перенесенной инфекции, хорошо обучены правилам личной гигиены и мерам профилактики. У грудничков, находящихся на грудном вскармливании, заболевание возникает довольно редко, так как вместе с материнским молоком ребенок получает антитела к данному возбудителю.

Заражение происходит от здорового носителя инфекции или уже заболевшего человека. При этом в случае здорового вирусоносительства, которое может наблюдаться у уже переболевших детей или у детей с сильным иммунитетом, перенесших заболевание бессимптомно, период заразности для окружающих может достигать 5 месяцев. Длительность инкубационного периода после заражения составляет от 2 до 10 дней.

микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Основным механизмом передачи инфекции является фекально-оральный и реже воздушно-капельный путь. Заражение осуществляется по причине:

  • несоблюдения правил личной гигиены (отсутствие тщательного мытья рук с мылом после посещения туалета и перед едой);
  • употребления сырой воды;
  • контакта с предметами обихода и игрушками больного ребенка;
  • купания в общественных водоемах;
  • употребления немытых фруктов и овощей;
  • употребления молочных продуктов в термически необработанном виде.

Возможна также трансплацентарная передача энтеровирусной инфекции от зараженной беременной женщины к плоду.

Формы и симптомы заболевания

Входными воротами энтеровирусной инфекции являются слизистые оболочки носоглотки и пищеварительного тракта, где в ответ на попадание инфекционного агента наблюдается местная воспалительная реакция.

При хорошем местном иммунитете распространение вируса по организму ребенка ограничивается входными воротами, инфекция протекает бессимптомно или в очень легкой форме только с поражением слизистых оболочек. При недостаточном уровне иммунитета, большом количестве попавших вирусных частиц или высокой вирулентности вируса наблюдается генерализация инфекции. После размножения в кишечнике вирусы попадают в системный кровоток и разносятся по всему организму, поражая те органы и ткани, к которым у них имеется тропность. Наблюдаемая клиническая картина при этом может быть самой разнообразной. Патогенная деятельность вируса у детей идет на спад с момента выработки организмом специфических антител.

Энтеровирусные инфекции в зависимости от наблюдаемой клинической картины делят на типичные и редкие (атипичные) формы. К типичным относятся:

  • герпетическая ангина;
  • серозный менингит;
  • эпидемическая миалгия;
  • энтеровирусная экзантема.

Атипичными формами являются:

  • миокардит;
  • энцефалитическая и или полиомиелитоподобная форма;
  • энцефаломиокардит новорожденных;
  • энтеровирусный увеит;
  • эпидемический геморрагический конъюнктивит;
  • энтеровирусная лихорадка;
  • респираторная (катаральная) форма;
  • энтеровирусная диарея (гастроэнтерит);
  • поражение мочеполовой системы (геморрагический цистит, нефрит, охрит, эпидидимит);
  • панкреатит.

микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Развитие заболевания у детей, как правило, имеет острый характер, начинается с резкого повышения температуры тела до 39–40°С, сохраняющейся от 3 до 5 дней, озноба, общей слабости, головной боли, снижения аппетита. Возможны тошнота и рвота, увеличение шейных и подчелюстных лимфоузлов, где происходит размножение вируса. Перечисленные симптомы энтеровирусной инфекции характерны практически для всех клинических форм ее протекания.

Герпетическая ангина

Типичным признаком герпетической ангины у ребенка является умеренная гиперемия и появление высыпаний на слизистых ротовой полости и горла (небные дужки, миндалины, мягкое и твердое небо, язычок) в первые сутки болезни. Вначале элементы сыпи представляют собой красные не сливающиеся между собой папулы, а затем превращаются в везикулы диаметром 1–2 мм. Их количество может варьировать от 3 до 18. Спустя 2 дня пузырьки самопроизвольно вскрываются с образованием небольших ранок или рассасываются, не оставляя следа. Для герпетической ангины характерна болезненность при пальпации шейных и подчелюстных лимфоузлов.

микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Серозный менингит

Серозный менингит является тяжелой и наиболее распространенной формой протекания энтеровирусной инфекции у детей. К его симптомам относятся сильная головная боль, апатия, подъем температуры тела, рвота, возбужденное состояние, беспокойство, судороги, а также ряд симптомов, возникающих вследствие раздражения и воспаления мозговых оболочек:

  • симптомы Брудзинского и Кернига;
  • светобоязнь;
  • повышенная чувствительность к звукам;
  • сильная головная боль при попытке прижать подбородок к груди;
  • ригидность затылочных мышц и другие.

Спустя 3–5 дней клиническая картина начинает регрессировать, при этом симптомы могут сохраняться до 10 дней, а вирус обнаруживается в спинномозговой жидкости в течение 2–3 недель. Остаточные явления после серозного менингита в виде гипертензионного и астенического синдрома могут отмечаться еще на протяжении 2–3 месяцев.

микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Энтеровирусная экзантема

Энтеровирусная экзантема у ребенка проявляется в виде кожной сыпи. Ее элементы присутствуют на коже лица, туловища, конечностях, реже в ротовой полости. Они представляют собой розовые пятна или папулы, которые быстро проходят в течение трех дней, не оставляя после себя никаких следов. В некоторых случаях непродолжительное время после исчезновения сыпи на коже отмечается шелушение и легкая пигментация.

Энтеровирусная экзантема может развиваться совместно с серозным менингитом или герпетической ангиной.

микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Эпидемическая миалгия

Основным симптомом эпидемической миалгии являются интенсивные мышечные боли. У детей присутствуют жалобы на приступы острой боли в грудной клетке и верхней части живота, реже – в области спины, рук и ног. При движении болевые ощущения усиливаются, кожные покровы становятся бледными, происходит повышенное потоотделение, учащение дыхания. Как и энтеровирусная экзантема, данная форма может протекать совместно с герпетической ангиной и серозным менингитом.

Диагностика

При подозрении на энтеровирусную инфекцию необходимо обратиться к наблюдающему ребенка педиатру. В зависимости от конкретной формы заболевания дополнительно может понадобиться консультация офтальмолога, отоларинголога, невролога, кардиолога или других специалистов. Подтвердить диагноз врач сможет на основании видимых симптомов, оценки общей эпидемиологической ситуации в регионе и результатов анализов. Основными лабораторными исследованиями, показанными в данном случае, являются:

  • общий анализ крови;
  • выявление специфических фрагментов РНК энтеровируса в исследуемом материале;
  • серологические исследования, основанные на реакциях иммунитета по отношению к вирусу (иммуноферментный анализ, реакции связывания комплемента и торможения гемагглютинации и другие) и выполненные в парных сыворотках через определенные промежутки времени.

Для выявления возбудителей инфекции у детей в зависимости от зоны поражения используются различные биологические материалы: кровь, выделения из глаз, смывы с носоглотки, соскобы с кожи, фекалии.

В общем анализе крови при энтеровирусной инфекции наблюдается повышение концентрации лейкоцитов, нейтрофилов (на ранней стадии болезни), эозинофилов и лимфоцитов (по мере прогрессирования заболевания), сдвиг лейкоцитарной формулы влево и увеличение СОЭ. При серологических исследованиях в случае наличия в организме энтеровирусов должно наблюдаться не менее чем 4-х кратное увеличение титра антител между парными сыворотками.

При некоторых формах энтеровирусной инфекции необходима дифференциальная диагностика с другими заболеваниями, протекающими со схожей симптоматикой:

  • герпетическую ангину дифференцируют с поражением слизистой полости рта и горла вирусом простого герпеса и грибами рода Candida;
  • серозный менингит следует отличать от поражения оболочек мозга, вызванных менингококковой инфекцией, туберкулезом и другими инфекционными заболеваниями;
  • энтеровирусную экзантему дифференцируют с краснухой, скарлатиной, корью, аллергической реакцией в виде крапивницы;
  • эпидемическую миалгию отличают от плеврита, острого аппендицита, перитонита, панкреатита, холецистита.

Лечение

Энтеровирусная инфекция у относительно здоровых детей протекает преимущественно в легкой форме. Лечение проводится в домашних условиях за исключением случаев поражения нервной системы и жизненно важных органов (сердце, печень, почки). Госпитализация показана также, если у ребенка длительно сохраняется высокая температура, которая не снижается в ответ на прием жаропонижающих средств.

Специфических препаратов для лечения болезни, непосредственно воздействующих на энтеровирусы, на данный момент нет, поэтому основная терапия заключается в поддержке и укреплении иммунной системы, повышении ее защитных функций. Для этого при необходимости применяют иммуноглобулины, иммуномодулирующие препараты и препараты интерферона.

Для устранения и облегчения симптомов энтеровирусной инфекции у детей могут использоваться следующие лекарственные средства:

  • жаропонижающие препараты на основе парацетамола или ибупрофена при высокой температуре;
  • средства для регидратации и снятия интоксикации (водно-солевые растворы регидрон, хумана электролит, гидровит и другие, глюкоза, смекта, энтеросгель);
  • антигистаминные препараты;
  • противорвотные средства;
  • обезболивающие препараты;
  • полоскания и спреи для горла;
  • препараты для восстановления микрофлоры кишечника (линекс, лактовит, бифиформ).

При высокой температуре показан постельный режим. Важным элементом лечения энтеровирусной инфекции у детей в течение всего периода болезни является обильное питье (негазированная минеральная вода, компоты, морсы, чай), частая влажная уборка и регулярное проветривание комнаты, где находится ребенок, на что особо обращает внимание педиатр Е. О. Комаровский. Питание должно быть по желанию ребенка и состоять из легких для усвоения продуктов (каши на воде, вареное нежирное мясо, овощи, супы без наваристого бульона, кефир, галетное печенье).

В период лечения и до полного выздоровления больной ребенок должен быть изолирован от здоровых детей. Во избежание массового распространения инфекции ему запрещается посещать детский сад, школу или другие детские коллективы.

Видео: Педиатр Комаровский Е. О. об энтеровирусных инфекциях и их особенностях

Осложнения

Энтеровирусная инфекция в большинстве случаев имеет благоприятный для ребенка прогноз и заканчивается полным выздоровлением. Наибольшую опасность она представляет для новорожденных и детей с ослабленным иммунитетом, онкологическими заболеваниями, ВИЧ-инфицированных.

Серьезные осложнения в виде отека мозга, эпилепсии, психических расстройств, повышения внутричерепного давления возможны при энтеровирусном энцефалите, энцефаломиокардите новорожденных, менингите. При тяжелом течении заболевания существует вероятность генерализации инфекции, развития пневмонии, острой дыхательной недостаточности, присоединения вторичной бактериальной инфекции.

Профилактика

Профилактика энтеровирусной инфекции состоит в следующих мерах:

  • строгое соблюдение правил личной гигиены;
  • употребление только кипяченой или бутилированной воды;
  • общее укрепление иммунной системы;
  • тщательное мытье сырых фруктов и овощей перед употреблением;
  • частое проветривание и влажная уборка в помещении;
  • избегание посещений мест массового скопления людей при вспышке эпидемии;
  • запрет на купание в открытых водоемах, не имеющих специального разрешения.

Учитывая многочисленность серотипов энтеровирусов, эффективная профилактика инфицирования ими детей путем вакцинации на данный момент не разработана.

Энтеровирусная инфекция. Название одно, а заболеваний, которые можно отнести к этому типу, — великое множество. О том, что это такое, как передается и что делать, если педиатр ставит ребенку соответствующий диагноз, рассказывает известный доктор, автор книг и статей о детском здоровье, Евгений Комаровский.

Что это такое?

Энтеровирусная инфекция — это заболевание, которое вызывается вирусами, проникающими в организм через желудочно-кишечный тракт. В народе недуг называется «болезнью грязных рук», хотя спектр действия энтеровирусов достаточно широк. К возбудителям относятся:

  • энтеровирусы — 4 типов;
  • вирусы полиомиелита — 3 типа;
  • эховирусы — 31 тип;
  • вирусы Коксаки (А и В) — около 30 типов.

Все эти вирусы очень устойчивы к кислотной среде, поэтому им легко удается выжить в условиях атаки желудочного сока и попасть в кишечник, где они и начинают проявлять свою патогенную активность. Кроме того, эти вирусы могут существовать в условиях обычной комнатной температуры в течение нескольких суток.

Симптомы

Распознать энтеровирусную инфекцию не так просто, как кажется. Около 90% полиомиелитных инфекций протекают скрытно, почти половина остальных энтеровирусов также не дают никаких специфическим симптомов. Лишь некоторые возбудители способны давать определенную клиническую картину, которая и позволяет заподозрить у ребенка энтеровирусную инфекцию:

  • лихорадка, повышенная температура тела;
  • респираторные проявления – насморк, кашель, боль в горле;
  • боли в животе, диарея. Этот симптом встречается редко.

Обычно энтеровирусы вызывают заболевания, которые врачи условно делят на потенциально-тяжелые и менее опасные. К первым относятся энцефалит и серозный менингит, миокардит и гепатит. К менее опасным относятся лихорадка с сыпью или без нее, герпетическая ангина, конъюнктивит, фарингит, гастроэнтерит, трехдневная лихорадка.

Диагностика, в силу размытости симптомов, затруднена. Врач, которого родители вызовут на дом, может только поставить предположительный диагноз, но точно ответить на вопрос, есть ли у ребенка энтеровирусная инфекция и какой именно вирус поразил его, помогут только лабораторные исследования:

  • серологический анализ крови;
  • вирусологическое исследование крови и кала;
  • молекулярно-биологический метод выделения энтеровирусов из лабораторного образца.

Поэтому, если у ребенка нет ничего, кроме повышенной температуры, ощущения ломоты в мышцах и небольшого насморка, врач-педиатр будет прав, предположив, что у малыша энтеровирусная инфекция.

Пути передачи

Энтеровирусы проникают в организм чаще всего через рот — с грязными руками, водой, продуктами питания. От больного человека ребенок вполне может заразиться и воздушно-капельным путем. Наиболее часто вспышки инфекции происходят летом и в начале осени. В городах и странах с жарким климатом вспышки вплоть до эпидемий наблюдаются чаще, чем в северных широтах.

Отсюда следует довольно широкое географическое распространение энтеровирусов в курортных городах, на популярных многолюдных морских побережьях. В 2017 году в Турции свирепствовал вирус Коксаки, в 2000м — вирус ЕСНО поражал сотни людей в Сингапуре, на Тайване. Время от времени небольшие очаги фиксируются и на Черноморском побережье в России. Однако это вовсе не означает, что вдали от моря и солнца таких вирусов нет. Они распространены повсеместно.

Лечение

Евгений Комаровский утверждает, что называть энтеровирусную инфекцию кишечной, не совсем правильно. То есть, она по сути является кишечной, но имеет строго вирусное происхождение. Тогда как кишечная инфекция, в широком понимании слова, может быть вызвана и токсинами, и бактериями.

Отсюда следует, что лечить энтеровирусные недуги следует по всем правилам терапии вирусных инфекций. Это означает, что антибиотики противопоказаны, поскольку они не оказывают ни малейшего влияния на вирусные частицы. При этом они увеличивают риски вторичных осложнений, в том числе, и на центральную нервную систему.

Прием противовирусных препаратов, которые с огромной долей вероятности назначит все тот же вызванный врач-педиатр, по мнению Евгения Комаровского, не имеет особого смысла. Ведь антивирусных средств с доказанной клинической эффективностью в России существует чрезвычайно мало. Все они относятся с разряду «тяжелых и серьезных» препаратов, которые применяют внутривенно в условиях инфекционных стационаров. Таблетки, в любой аптеке продающиеся без рецепта и позиционирующиеся, как «действенное средство от вирусов», к таким серьезным и, по-настоящему действенным средствам, никакого отношения не имеют.

Против энтеровирусов существуют специальные препараты — универсальными антивирусными таблетками этот вирус победить нельзя. Довольно часто врачи рекомендуют средства, которые относятся к группам интерферонов и иммуноглобулинов.

Однако при этом многие медики лукавят, говоря, что таблетки обязательно помогут ребенку. Большинству врачей известно, что иммуноглобулины показывают относительную клиническую эффективность только при внутривенном вливании и только у определенных групп пациентов — у новорожденных и у людей с ВИЧ-инфекцией.

Для всех остальных таблетки и капли, содержащие иммуноглобулин, прописывают исходя из принципа «надо что-то делать». Ребенок пьет практически безвредное средство, родители его лечат, совесть врача спокойна, поскольку он прекрасно знает, что через 3-6 дней неосложненная энтеровирусная инфекция пройдет и сама, без каких-либо таблеток вообще.

Исходя из всего этого, Комаровский рекомендует родителям, ребенок которых заболел энтеровирусной инфекцией, просто создать для него правильные условия способствующие скорейшему выздоровлению. Чем быстрее иммунитет справится с «захватчиком», тем скорее ребенок выздоровеет. По-настоящему действенные лечебные меры должны быть такими:

  • микроклимат в комнате должен быть благоприятным — температура воздуха от 18 до 20 градусов, независимо от времени года, а относительная влажность воздуха — 50-70%;
  • обильное питье, имеющее температуру тела — при таких условиях жидкость быстрее усваивается;
  • солевые промывания носа и носоглотки при наличии респираторных симптомов (насморка, кашля) – каждые полчаса, если ребенок не спит;
  • тщательные проветривания помещения, частая влажная уборка;
  • при отсутствии лихорадки — прогулки на свежем воздухе.

Профилактика

Специфической профилактики от энтеровирусов не существует. Нет ни одного медицинского препарата, прием которого позволял бы снизить риск заражения, хотя некоторые источники указывают в качестве профилактического средства противовирусные препараты группы интерферонов. Это утверждение, с точки зрения доказательной медицины, не имеет никаких реальных подтверждений, говорит Евгений Комаровский.

Прививок от энтеровирусов как таковых не разработано, исключение составляет вакцина от полиомиелита и гепатита. Но разновидностей вирусов больше, как и болезней, которые они вызывают. После болезни иммунитет к большинству энтеровирусов вырабатывается стойкий, его хватает на несколько лет.

Об энтеровирусной инфекции у детей в следующем видео рассказывает доктор Евгений Комаровский.

Желудочно-кишечный тракт ребенка имеет некоторые отличия от системы ЖКТ взрослого человека. Он более восприимчив к новым составляющим продуктов питания. У детей кишечный иммунитет еще не сформирован до конца, поэтому организм крайне чувствителен к различным вирусам.

В нежном возрасте можно столкнуться с двумя вариациями заболеваний инфекционной природы, поражающих кишечник и систему ЖКТ. Это ротавирусная и энтеровирусная инфекции. Последняя у детей встречается намного чаще, а без должного лечения может нанести непоправимый вред неокрепшему организму. Пик заболеваемости обычно приходится на весенне-осенний период. Чем отличается энтеровирус у детей? Симптомы, фото маленьких пациентов, а также подробная схема лечения представлены в материалах этой статьи.

Что такое энтеровирусная инфекция?

Данное понятие объединяет в себе несколько заболеваний, источниками которых выступают энтеровирусы. Иначе их называют кишечными. В настоящее время изучено более 60 видов этих возбудителей. В зависимости от серотипа, все они делятся на 4 группы: вирусы ECHO, Коксаки, полиовирусы и энтеровирусы.

Заболеть одним из серотипов ребенок может только раз в жизни. После лечения у него вырабатывается стойкий иммунитет. С другой стороны, он может заразиться иным энтеровирусом. Такое многообразие патогенов не позволяет ученым создать единственную эффективную вакцину.

Чем опасен энторовирус у детей? Вся серьезность инфекции заключается в том, что ее возбудители отличаются высокой устойчивостью к агрессивным факторам извне. Они могут в течение длительного времени существовать во влажной почве и воде, затем проникнуть в человеческий организм через зараженные продукты.

В начале 2008 года на территории Китая была зафиксирована масштабная эпидемия среди детей. Ее появление спровоцировал вирус EV71. Он проникает в организм человека через дыхательные пути, а также слизистую пищеварительного тракта. После разносится по всему телу кровеносной системой, поражая легкие и мозг. Инфекция была выявлена у 15 тысяч детей, причем 20 из них скончались. Это лишний раз свидетельствует о том, что энтеровирус у детей и взрослых требует своевременного и комплексного лечения.

Причины заражения

Инфекция развивается на фоне активизации групп кишечных вирусов, которые являются причиной возникновения определенной симптоматики. Все они отличаются рядом общих характеристик. В основе каждого вируса лежит ядро, представленное молекулой нуклеиновой кислоты. В одних случаях в ее роли выступает ДНК, в других — РНК. Снаружи внутренняя структура окружена капсулой, которая имеет некоторые особенности. В зависимости от конфигурации элементов оболочки, вирусы подразделяются на различные подтипы.

Энтеровирус проникает в организм при вдыхании воздуха или через рот во время еды. После этого возбудитель болезни мигрирует в лимфоузлы, где оседает и начинает размножаться. Дальнейшее его развитие, а также тяжесть инфекционного процесса зависят от нескольких факторов:

  • вирулентность вируса (способность противостоять иммунитету организма);
  • тропизм (возможность возбудителя инфекции поражать внутренние органы);
  • состояние непосредственно самой иммунной системы.

Инкубационный период сколько длится? Энтеровирус у детей может не проявляться внешними симптомами от 1 до 12 дней. Как правило, инкубационный период составляет пять суток. Клиническая картина конкретного заболевания зависит непосредственно от серотипа возбудителя. Энтеровирус обычно активизируется весной и осенью. В другие времена года заболеваемость гораздо ниже.

Пути передачи инфекции

Энтеровирус может передаваться от больного человека к здоровому несколькими способами: воздушно-капельным, фекально-оральным, контактным. Механизм распространения заболеваний характеризуется большим многообразием. Энтеровирус у детей передается преимущественно через сырую воду или игрушки. Возбудители недуга в течение длительного времени могут находиться в жизнеспособном состоянии в фекалиях, почве, а также воде. Даже процесс замораживания не является для них губительным. Патоген погибает под действием дезинфицирующих средств только в том случае, если четко соблюдено время обработки.

Энтеровирус у детей до года имеет схожие причины возникновения. Однако у малышей, находящихся на грудном вскармливании, к большинству серотипов имеется врожденный иммунитет. С другой стороны, ребенок может подцепить инфекцию сразу после окончания употребления материнского молока.

Клиническая картина

Стадия инкубационного периода обычно не проявляется никакими симптомами. В это время вирусы оседают на слизистых и попадают в лимфатическую систему, где начинают активно размножаться.

Затем следует этап непосредственно самой болезни. Признаки энтеровируса у детей начинают проявляться с резкого повышения температуры, которая достигает критической отметки и сохраняется в течение пяти суток. Ребенок мало двигается и много спит. Первые дни после заражения могут также сопровождаться сильной рвотой и головными болями. Как только температура нормализуется, все сопутствующие симптомы проходят.

Иногда у детей наблюдается увеличение лимфоузлов, в основном подчелюстных и шейных. Еще одним симптомом болезни является экзантема. Высыпания появляются одновременно на голове, груди и руках. Они имеют вид красных пятен. После их исчезновения на теле остаются небольшие пигментные отметины, которые самостоятельно проходят через несколько суток.

Интенсивность клинической картины напрямую зависит от состояния иммунитета ребенка, полученной «порции» вируса и некоторых особенностей его вида.

Частые формы энтеровирусной инфекции

Знание полной классификации обычно не требуется. Родители должны уметь распознавать наиболее распространенные формы энтеровирусной инфекции, чтобы своевременно определить патологию и обратиться к врачу.

  1. Герпетическая ангина. Это катаральное проявление энтеровируса. Герпетическая ангина обычно встречается у детей от трех до десяти лет. Основными ее проявлениями являются высокая температура, болезненность в горле и везикулы на задней стенке глотки. Пузырьки лопаются и образуют язвочки. Главными возбудителями считаются вирусы Коксаки А и В.
  2. Экзантема. Это один из наиболее распространенных примеров, как может проявляться энтеровирус. У детей сыпь имеет два выраженных типа: красноухоподобный и розеолезный. Экзантема может появиться на первый или второй день после заражения. Высыпания возникают на лице, теле и имеют вид мелких красных пятнышек. Иногда они сливаются воедино между собой. На фоне красных высыпаний также могут появляться геморрагические элементы. Энтеровирусной экзантеме в большей степени подвержены дети до шести лет.
  3. Гриппоподобный синдром. Данная форма энтеровирусной инфекции характеризуется симптомами типичного гриппа или ОРВИ. У детей наблюдаются катаральные явления (насморк, отечность, заложенность носа), повышение температуры, слабость, боль в мышцах. Из типичных для синдрома симптомов, которые отличают его от обычного гриппа, можно выделить расстройство стула и рвоту.
  4. Кишечная форма. Это один из наиболее опасных вариантов энтеровирусной инфекции. Сопровождается умеренным подъемом температуры, водянистой диареей, вздутием живота и метеоризмом. Главной опасностью кишечной формы считается высокая вероятность обезвоживания организма, что осложняет состояние маленького пациента. Такое расстройство требует постоянного контроля со стороны врачей и неотложной помощи.

Все разновидности инфекции могут протекать по типичной/атипичной клинической картине. В зависимости от вида патологии врач выбирает, чем лечить энтеровирус у детей.

Редкие формы инфекции

В некоторых случаях энтеровирусная инфекция характеризуется осложненным течением. Ее также относят к категории типичных, но при этом она является комбинированной. Маленьким пациентам требуется комплексное и более сложное лечение.

  1. Геморрагический конъюнктивит. Это достаточно распространенная форма энтеровирусной инфекции. Ее проявления начинаются с сильной боли в глазу, частичной потери зрения и повышенного слезотечения. Иногда наблюдаются кровоизлияния в сетчатку.
  2. Миокардит/перикардит. При данной патологии в первую очередь страдают определенные структуры сердца. На фоне поражения миокарда нарушается сократительная функция главной мышцы организма. Вовлечение в патологический процесс перикарда характеризуется изменением процесса кровенаполнения.
  3. Менингит и энцефалит. Это самые тяжелые и одновременно опасные формы энтеровирусной инфекции. Они начинаются с повышения температуры до отметки в 40 градусов. На следующий день появляется нестерпимая головная боль, сильная рвота, которая не связана с приемом пищи. Распространенными симптомами являются боль в области живота, судороги, геморрагическая сыпь.

Атипичные варианты инфекции характеризуются бессимптомным и скрытым течением. Клиническая диагностика становится возможной только в случае появления видимых осложнений.

Энтеровирусная инфекция у детей отличается разнообразным течением. Поэтому важно вовремя обратиться к врачу с целью прохождения диагностического обследования. Оно позволяет дифференцировать инфекцию от обычных респираторных заболеваний, отравлений и дерматологических проблем.

Медицинское обследование

Признаки энтеровирусной инфекции у маленьких пациентов обычно проявляются серозным менингитом и герпетической ангиной. Групповые вспышки эпидемии часто фиксируют в дошкольных учреждениях в теплое время года. Главным механизмом передачи инфекции является фекально-оральный.

Выше мы уже рассказали, какими симптомами характеризуется энтеровирус. Фото (у детей) различных форм его проявления можно посмотреть в специализированных источниках. Они помогают заметить недуг и обратиться к врачу. В настоящее время существует четыре основные метода выявления возбудителя инфекции:

  • Серологический (выявление вируса в сыворотке крови). К ранним маркерам патологии относятся IgA и IgM. Также значимым для диагностики считается нарастание титра 4-кратного значения.
  • Вирусологический (определение возбудителя инфекции в ликворе, фекалиях, крови). Испражнения исследуют на протяжении двух недель.
  • Иммуногистохимический (выявление в крови антигенов к энтеровирусам).
  • Молекулярно-биологические способы (исследование фрагментов РНК энтеровирусов).

Особое внимание врачи уделяют дифференциальной диагностике. Энтеровирус у детей в различных его проявлениях важно отличать от герпеса, ОРВИ, аллергических реакций. Кроме того, необходимо проверить чувствительность к действию антибактериальных препаратов. Благодаря достижениям современной микробиологии качественная диагностика не несет в себе трудностей. При своевременном выявлении источника недуга можно относительно быстро вылечить ребенка любого возраста.

Медикаментозная терапия

Как лечить энтеровирус у детей? Именно этим вопросом задаются многие родители, услышав диагноз. При легком течении недуга маленький пациент может оставаться дома. Показаниями для незамедлительной госпитализации считаются следующие состояния: поражение ЦНС, сердца, сильный жар.

Современная медицина не может предоставить единственного универсального средства против инфекции. В остром периоде маленьким пациентам рекомендуют соблюдение постельного режима, витаминизированной диеты и обильное питье. Чем лечить энтеровирус у детей?

Если недуг сопровождается температурой, головными и мышечными болями, целесообразным считается прием анальгетиков и жаропонижающих средств («Нурофен», «Парацетамол»). При диарее назначают препараты для нормализации водно-солевого баланса («Регидрон»). Антибиотики используются только в случае присоединения бактериальных инфекций.

Чтобы помочь организму справиться с энтеровирусом, детям прописывают интерфероны («Виферон», «Циклоферон», «Неовир»). Они относятся к категории неспецифических противовирусных средств, которые тормозят размножение вирусов и активизируют работу иммунной системы.

Лечение должен назначать врач после комплексного обследования маленького пациента. Только специалист может правильно распознать симптомы и заподозрить энтеровирус. Инфекция у детей часто сопровождается поражением ЦНС, глаз и почек. В таком случае ребенку, помимо лекарственной терапии, показано наблюдение у врача на протяжении нескольких месяцев. Иногда может потребоваться несколько лет.

Рекомендации по питанию

Диета при энтеровирусе у детей играет важную роль, поскольку нарушается работа ЖКТ. В первую очередь она подразумевает под собой обильное питье. Употребление обычной негазированной воды в больших количествах способствует выведению токсинов из организма, является профилактикой обезвоживания.

Из рациона педиатры рекомендуют исключить жареные и копченые блюда, все сладости и выпечку. Важно ограничить потребление продуктов из цельного молока, сливочного масла, яиц. Под запрет также попадают мясной бульон, орехи, бобовые и хлеб. Пищу следует готовить на пару или запекать в духовом шкафу.

Что можно кушать? Рацион должен состоять из свежих овощей и фруктов, прошедших термическую обработку. Разрешаются кисломолочные продукты (биокефир, нежирный творог). Можно кушать нежирное мясо, рыбу. Их лучше подавать ребенку в измельченном или даже протертом виде. В целом питание должно быть дробным. Кушать рекомендуется часто, но небольшими порциями. Если ребенок отказывается от еды, не следует его принуждать и насильно кормить.

Что делать, когда острая диарея сопровождается энтеровирус? Лечение у детей школьного возраста в этом случае подразумевает соблюдение так называемой голодной паузы. Полезно пропустить один или два приема пищи. Голодные паузы у грудничков недопустимы. Затем маленьким пациентам назначается строгая диета.

В первый день можно кушать каши на воде и печеные яблоки. По мере улучшения общего состояния ребенка в рацион следует вводить кисломолочные продукты, овощные супы-пюре. В последнюю очередь разрешаются блюда из мяса и рыбы.

Осложнения энтеровирусной инфекции

Энтеровирус у детей, симптомы и лечение которого были описаны ранее, может проникать во все органы и ткани. Это объясняет большое количество его проявлений. В большинстве случаев ребенку удается пережить недуг без серьезных осложнений для здоровья. По причине ослабленного иммунитета или наличия сопутствующих заболевания негативные последствия все же могут возникнуть. Как правило, врачи диагностируют менингит и энцефалит.

Эти заболевания поражают мозг маленького пациента, что может привести к эпилепсии, параличу или летальному исходу. Также известны случаи присоединения вторичной инфекции, что требует дополнительной терапии. Летальные исходы обычно обусловлены острой сердечной или легочной недостаточностью. Если комплексное обследование подтверждает энтеровирус, лечение у детей должен назначать педиатр. Пытаться самостоятельно побороть недуг категорически запрещено. Родители могут нанести здоровью малыша непоправимый вред.

Методы профилактики

Специфическая профилактика энтеровируса у детей не разработана. Однако хорошие результаты показывают прививки против менингококцемии и полиомиелита. Во многих европейских государствах теперь применяется вакцинирование против наиболее распространенных возбудителей энтеровирусной инфекции. Однако и такая профилактика не дает абсолютной гарантии ввиду многообразия вирусов. Исследования и клинические испытания по данному вопросу продолжаются.

Чтобы предупредить инфицирование семьи заразившегося ребенка, его следует изолировать. Необходимо чаще проветривать помещения, ежедневно проводить влажную уборку с дезинфицирующими средствами. Неспецифическая профилактика подразумевает соблюдение элементарных правил личной гигиены, применение интерферонов («Лаферон», «Назоферон», «Виферон»).

Теперь вы знаете, чем отличается энтеровирус у детей. Симптомы и лечение заболеваний, источником которых выступает данный возбудитель, требуют грамотного подхода со стороны специалистов. Если не откладывать визит к врачу, можно предупредить возникновение опасных для жизни осложнений. Будьте здоровы!

Энтеровирусные инфекции – это группа заболеваний, в основе причин которых лежит несколько разновидностей вирусов. Вызывают заболевание вирусы Коксаки, полиовирусы и ЕСНО (экхо). Эти вирусы имеют в своем строении капсулу и ядро, содержащее РНК (разновидность ДНК). Строение капсулы может очень сильно отличаться, поэтому выделяют так называемые серотипы (разновидности). У полиовирусов выделяют 3 серологических типа. Вирусы группы Коксаки делятся на Коксаки А и Коксаки В. У вирусов Коксаки А выделяют 24 серологических разновидности, у Коксаки В – 6. У вирусов ЕСНО выделяют 34 серологических типа. После перенесенной энтеровирусной инфекции образуется стойкий пожизненный иммунитет, однако, он сероспицефичен. Это значит, что иммунитет образуется только к тому серологическому типу вируса, которым переболел ребенок и не защищает его от других разновидностей этих вирусов. Поэтому энтеровирусной инфекцией ребенок может болеть несколько раз за свою жизнь. Так же эта особенность не позволяет разработать вакцину, чтобы защитить наших детей от данного заболевания. Заболевание имеет сезонность: вспышки заболевания чаще всего наблюдаются в летне-осенний период.

Причины заражения энтеровирусной инфекцией

Заражение происходит несколькими путями. Вирусы в окружающую среду могут попадать от больного ребенка или от ребенка, который является вирусоносителем. У вирусоносителей нет никаких проявлений заболеваний, однако вирусы находятся в кишечнике и выделяются в окружающую среду с калом. Такое состояние может наблюдаться у переболевших детей после клинического выздоровления либо у детей, у которых вирус попал в организм, но не смог вызвать заболевание из-за сильного иммунитета ребенка. Вирусоносительство может сохраняться на протяжении 5 месяцев.

Попав в окружающую среду, вирусы могут сохраняться довольно долго, так как хорошо переносят неблагоприятное воздействие. Хорошо сохраняются вирусы в воде и почве, при замораживании могут выживать на протяжении нескольких лет, устойчивы к действию дезинфицирующих средств (при воздействии растворов высокой концентрации фенола, хлора, формалина вирусы начинают погибать только через три часа), однако восприимчивы к действию высоких температур (при нагревании до 45º С погибают через 45-60 секунд). Вирусы хорошо переносят перепады рН среды и отлично себя чувствуют в среде с рН от 2,3 до 9,4, поэтому кислая среда желудка не оказывает на них никакого воздействия и кислота не выполняет своей защитной функции.

Как передается энтеровирусная инфекция

Механизм передачи может быть воздушно-капельный (при чихании и кашле с капельками слюны от больного ребенка к здоровому) и фекально-оральный при не соблюдении правил личной гигиены. Чаще всего заражение происходит через воду, при употреблении сырой (не кипяченой) воды. Так же возможно заражение детей через игрушки, если дети их берут в рот. Болеют чаще всего дети в возрасте от 3 до 10 лет. У детей, находящихся на грудном вскармливании, в организме присутствует иммунитет, полученный от матери через грудное молоко, однако, этот иммунитет не стойкий и после прекращения грудного вскармливания быстро исчезает.

Симптомы энтеровирусной инфекции

В организм вирусы попадают через рот или верхние дыхательные пути. Попав в организм ребенка, вирусы мигрируют в лимфатические узлы, где они оседают и начинают размножаться. Дальнейшее развитие заболевания связано со многими факторами, такими как вирулентность (способность вируса противостоять защитным свойствам организма), тропизмом (склонностью поражать отдельные ткани и органы) вируса и состоянием иммунитета ребенка.

У энтеровирусных инфекций есть как схожие проявления, так и различные, в зависимости от вида и серотипа. Инкубационный период (период от попадания вируса в организм ребенка, до появления первых клинических признаков) у всех энтеровирусных инфекций одинаковый – от 2 до 10 дней (чаще 2-5 дней).

Заболевание начинается остро — с повышения температуры тела до 38-39º С. Температура чаще всего держется 3-5 дней, после чего снижается до нормальных цифр. Очень часто температура имеет волнообразное течение: 2-3 дня держится температура, после чего снижается и 2-3 дня находится на нормальных цифрах, затем снова поднимается на 1-2 дня и вновь нормализуется уже окончательно. При повышении температуры ребенок ощущает слабость, сонливость, может наблюдаться головная боль, тошнота, рвота. При снижении температуры тела все эти симптомы проходят, однако при повторном повышении могут вернуться. Также увеличиваются шейные и подчелюстные лимфоузлы, так как в них происходит размножение вирусов.

В зависимости от того, какие органы больше всего поражаются, выделяют несколько форм энтеровирусной инфекции. Энтеровирусы могут поражать: центральную и периферическую нервные системы, слизистую ротоглотки, слизистую глаз, кожу, мышцы, сердце, слизистую кишечника, печень, у мальчиков возможно поражение яичек.

При поражении слизистой ротоглотки происходит развитие энтеровирусной ангины. Она проявляется повышением температуры тела, общей интоксикацией (слабость, головная боль, сонливость) и наличие везикулярной сыпи в виде пузырьков, заполненных жидкостью, на слизистой ротоглотки и миндалинах. Пузырьки эти лопаются, и на из месте образуются язвочки, заполненные белым налетом. После выздоровления на месте язвочек не остается никаких следов.

При поражении глаз развивается конъюнктивит. Он может быть одно- и двусторонним. Проявляется в виде светобоязни, слезотечения, покраснения и припухлости глаз. Возможно наличие кровоизлияний в конъюнктиву глаза.

При поражении мышц развивается миозит – боли в мышцах. Боли появляются на фоне повышения температуры. Болезненность наблюдается в грудной клетке, руках и ногах. Появление болей в мышцах, как и температуры, может носить волнообразный характер. При снижении температуры тела боли уменьшаются или исчезают совсем.

При поражении слизистой кишечника наблюдается наличие жидкого стула. Стул обычной окраски (желтый или коричневый), жидкий, без патологических (слизь, кровь) примесей. Появление жидкого стула может быть как на фоне повышение температуры, так, и изолировано (без повышения температуры тела).

Энтеровирусные инфекции могут поражать различные участки сердца. Так при поражении мышечного слоя развивается миокардит, при поражении внутреннего слоя с захватом клапанов сердца, развивается эндокардит, при поражении внешней оболочки сердца – перикардит. У ребенка может наблюдаться: повышенная утомляемость, слабость, учащенное сердцебиение, падение артериального давления, нарушения ритма (блокады, экстрасистолы), боли за грудиной.

При поражении нервной системы могут развиваться энцефалиты, менингиты. У ребенка наблюдается: сильная головная боль, тошнота, рвота, повышение температуры тела, судороги, парезы и параличи, потеря сознания.

При поражении печени развивается острый гепатит. Он характеризуется увеличением печени, чувством тяжести в правом подреберье, болью в этом месте. Возможно появление тошноты, изжоги, слабости, повышения температуры тела.

При поражении кожи возможно появление экзантемы – гиперемия (красное окрашивание) кожи, чаще всего на верхней половине туловища (голова, грудь, руки), не приподнимается над уровнем кожи, появляется одномоментно. В моей практике наблюдалась энтеровирусная инфекция с кожным проявлением в виде везикулярной сыпи на ладонях и стопах. Пузырьки через 5-6 дней сдувались, не вскрываясь, и на их месте образовывался участок пигментации (коричневая точка), которая исчезала через 4-5 дней.

У мальчиков возможно наличие воспаления в яичках с развитием орхита. Чаще всего такое состояние развивается через 2-3 недели после начала заболевания с другими проявлениями (ангина, жидкий стул и другие). Заболевание довольно быстро проходит и не несет никаких последствий, однако, в редких случаях возможно развитие в половозрелом возрасте аспермии (отсутствие спермы).

Также существуют врожденные формы энтеровирусной инфекции, когда вирусы попадают в организм ребенка через плаценту от матери. Обычно такое состояние имеет доброкачественное течение и излечивается самостоятельно, однако в некоторых случаях энтеровирусная инфекция может вызвать прерывание беременности (выкидыш) и развитие у ребенка синдрома внезапной смерти (смерть ребенка наступает на фоне полного здоровья).
Очень редко возможно поражение почек, поджелудочной железы, легких. Поражение различных органов и систем может наблюдаться как изолированное, так и сочетанное.

Диагностика энтеровирусной инфекции

Для постановки точного диагноза берутся смывы из носа, зева или из попы ребенка, в зависимости от симптомов заболевания. Смывы высеваются на клеточные культуры, и после инкубации на протяжении 4 дней проводят полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Так как это занимает довольно длительное время, диагноз ставят на основании клинических проявлений (симптомов), а ПЦР служит только для подтверждения диагноза и не влияет на проводимое лечение.

Лечение энтеровирусной инфекции

Специфического лечения энтеровирусной инфекции не существует. Лечение проводят в домашних условиях, госпитализация показана при наличии поражения нервной системы, сердца, высокой температуры, которая долго не поддается снижению при использовании жаропонижающих средств. Ребенку показан постельный режим на весь период повышения температуры тела.

Питание должно быть легким, богатым белками. Необходимо достаточное количество жидкости: кипяченая вода, минеральная вода без газов, компоты, соки, морсы.

Лечение проводят симптоматически в зависимости от проявлений инфекции — ангина, конъюнктивит, миозит, жидкий стул, поражения сердца, энцефалиты, менингиты, гепатит, экзантема, орхит. В некоторых случаях (ангина, понос, конъюнктивит…) проводят профилактику бактериальных осложнений.

Дети изолируются на весь период заболевания. В детском коллективе могут находиться после исчезновения всех симптомов заболевания.

Профилактика энтеровирусной инфекции

Для профилактики необходимо соблюдение правил личной гигиены: мыть руки после посещения туалета, прогулки на улице, пить только кипяченую воду или воду из заводской бутылки, недопустимо использование для питья ребенка воды из открытого источника (река, озеро).

Специфической вакцины против энтеровирусной инфекции не существует, так как в окружающей среде присутствует большое количество серотипов этих вирусов. Однако в Европе часто используют вакцины, содержащие наиболее часто встречающиеся энтеровирусные инфекции (Коксаки А-9, В-1, ЕСНО -6). Использование таких вакцин снижает риск заболеваемости у детей энтеровирусными инфекциями.

Врач педиатр Литашов М.В.

No related posts.

26/09/96 Микробиология Лекция №2 Энтеровирусы

   Род энтеровирусов относится к семейству пикорнавирусов. Пико — означает маленький, рна — означает РНК содержащий. К семейству пикорнавирусов относятся как  явствует из названия маленькие РНК-содержащие вирусы. Семейство включает в себя 4 рода, из которых особо важен род энтеровирусов. Основное место обитания энтеровирусов в природе — это организм человека, а точнее кишечник, отсюда название. Кишечник является единственным резервуаром многих энтеровирусов, откуда вирусы попадают в кровь, во внутренние органы, ЦНС. В род  энтеровирусов входят:

  •  возбудители полиомиелита, их 3 серологических типа, то есть 3 антигенных разновидностей, на которые нет перекрестного иммунитета
  • Вирусы Коксаки, из делят на подгруппы А и В, в подгруппу А входят 23 серотипа, в подгруппу В — 6 серотипов.
  • Вирусы ЕСНО. Известно  32 серотипа этих вирусов
  • Полиомиелитоподобные вирусы
  • Вирусы гепатита А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНТЕРОВИРУСОВ:

  1.  Это РНКовые вирусы
  2. Имеют малые размеры 20-30 нм)
  3. Небольшое  число капсомеров, не окруженных какой-либо оболочкой
  4. Тип симметрии капсида — кубический
  5. Термоустойчивы
  6. Устойчивы к эфиру, к кислой среде, благодаря чему вирусы проходят через желудок, устойчивы к желчи, пищеварительным сокам.

ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ:

  • Естественная локализация — кишечник человека
  • Основной путь распространения — фекально-оральный
  • Широкое распространение в природе
  • Преимущественная циркуляция в летне-осенний период времени
  • Широкое вирусоносительство у практически  здоровых людей
  • Заболевание чаще встречается в детском возрасте, болеют чаще всего дети 6-12 лет, еще чаще дети первых 5 лет жизни.

ПОЛИОМИЕЛИТ (polios  — серый, myelos — спинной мозг). Само название говорит о том, что вирусом поражается серое вещество спинного мозга. При паретических  формах полиомиелита фактически нарушается двигательная иннервация, которая отвечает за движение мышц. Возникают атрофические параличи, чаще нижних, реже верхних конечностей, в зависимости от того какой сегмент спинного мозга затронут. Заболевание очень тяжелое, калечащее. Известно давно, о нем упоминает Гиппократ. В планах ВОЗ  полное уничтожение заболеваемости полиомиелитом на Земле к 2000 году. Но, к сожалению, полиомиелит нередко встречается в СНГ. На первом месте по данным ВОЗ по заболеваемости полиомиелитом стоит Таджикистан, на втором — Узбекистан, на третьем — Азербайджан, на четвертом — Турция, на пятом — Россия.

   Вирус был открыт в 1945 году. Существует 3 возбудителя полиомиелита:

  1. Серотип Брунгинда
  2. Серотип Лансинга
  3. Серотип Леон

  Серотип Брунгинда отличается наибольшей нейровирулентностью, наиболее патогенен для человека и в эксперименте для обезьян, выделяется в 80% случаях полиомиелита, чаще всего дает паралитические формы (1 случай на 1 на 100-1000 бессимптомных форм). Серотип Лансинга менее нейровирулентен, патогенен для человека, и в эксперименте для хлопковых крыс, и вызывает 1 острый случай на 1000-10000 бессимптомных форм. Серотип Леон наименее вирулентен, встречается реже всех, патогенен для человека и обезьян. Вирусы устойчивы во внешней среде и действию различных неблагоприятных факторов: устойчивы ко всем известным антибиотиками, химиопрепаратам, выдерживают  действие 70% спирта, 5% лизола,  поэтому их относят к самым устойчивым вирусам.

  КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ:  в курином эмбрионе энтеровирусы не растут, развиваются в организме обезьян и хлопковых крыс, развиваются в культурах тканей обезьян, эмбрионов, первичных культурах злокачественных опухолей. При внесении вируса в культуру ткани возникает феномен цитопатического действия. Вирусы полиомиелита не способны образовывать гемагглютинин. Для обнаружения их реакции гемагглютинации и гемосорбции не применимы.

  ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ПОЛИОМИЕЛИТА:  Инкубационный период 7-14 дней. Полиомиелит — очень  высококонтагиозное заболевание, источник — больной человек бессимптомной формой, основной путь передачи — фекально-оральный. У больного паралитической формой полиомиелита в 1 грамме фекалий содержится 1 млн. инфицирующих доз для обезьян. Фекально-оральный путь передачи является основным в странах с высоко развитой санитарной обстановкой. В странах  с высокоразвитой санитарной культурой ведущим путем передачи является воздушно-капельный. В первую неделю заболевания вирус может поселиться в окологлоточных лимфатических узлах и со слизью зева при кашле, чихании может выделяться в окружающую среду, заражая окружающих

ПАТОГЕНЕЗ. Возбудитель проникает через рот часто через грязные руки, посуду, воду. В определенном числе случае вирус проникает через кишечный барьер, попадает в кровь, возникает виремия. В ряде случаев вирус проникает через гематоэнцефалический барьер и попадает в спинной мозг, вызывая повреждение двигательной иннервации. Возбудитель полиомиелита может вызывать следующие заболевания:

  • асептический менингит
  • бессимптомные формы (инапарантная форма), когда вирус находится в кишечнике, не проникая в кровь.
  • Абортивная форма (малая болезнь). Вирус проникает в кровь, но через гематоэнцефалический барьер проникнуть не может. Клинически такая болезнь проявляется ангиной, катаром верхних дыхательных путей.
  • У небольшого числа детей вирус проникает через гематоэнцефалический барьер и вызывает поражение двигательных нейронов передних рогов спинного мозга так называемая паралитическая форма. Летальность при паралитической форме 10% и  у более половины детей  возникают стойкие параличи.

ИММУНИТЕТ при полиомиелите пожизненный, типоспецифический. Механизм иммунитета определяется 2-мя основными моментами:

  1. Гуморальный общий иммунитет, обеспечивается циркулирующими в крови иммуноглобулинами класса М и G2),
  2.  местный возникает в ткани кишечника и носоглотки, глотки, обеспечивая устойчивость этих тканей наличием секреторных иммуноглобулинов класса А.

ВИРУСЫ КОКСАКИ.   В городе Коксаки (Америка) в 1948 году в клинике полиомиелита от больных детей были выделены вирусы которые не реагировали с поливалентной сывороткой полиомиелита. У выделенных вирусов было найдено свойство вызывать заболевания у новорожденных мышей — сосунков. Деление вирусов Коксаки на 2 подгруппы (А и В) связано с их способностью по — разному поражать ткани новорожденных мышей.

  • Вирусы Коксаки подгруппы А вызывают вялые параличи, а подгруппы В — спастические параличи. Заболевания которые вызывают вирусы Коксаки: асептический менингит, ангина, лихорадочные заболевания с сыпью.
  • Вирусы Коксаки чаще всего вызывают энцефаломиокардит новорожденных.

  ВИРУСЫ ЕСНО. Е- enteric , C — cytopatogenetic, O — orpham, H — human.  В процессе изучение энтеровирусов были обнаружены вирусы которые не могли быть отнесены к энтеровирусам, так как они во первых не реагировали с полиомиелитной поливалентной сывороткой, во вторых они не были способны вызывать заболевания у мышей-сосунков, поэтому они не могли быть отнесены к вирусам Коксаки. Сначала их назвали  orphans- сиротки. Затем ЕСНО. Вирусы ЕСНО вызывают асептический менингит, гастроэнтерит у детей, лихорадочные заболевания с летней сезонностью.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭНТЕРОВИРУСОВ ЧЕЛОВЕКА.

 Лабораторную диагностику нужно вести одновременно на все вирусы, так как они вызывают однотипные заболевания.

Вирусологический метод: заражают хлопковых мышей (на вирус Коксаки) выращивают вирус на культуре ткани, заражают новорожденных мышей, и если они погибают, то ищут вирус. На культуре ткани определяют присутствие вируса по наличию цитопатического действия, цветной пробе Солка. Идентификация вируса осуществляется в иммунологических реакциях, построенных по принципу антиген-антитело: в реакции нейтрализации. Положительный результат реакции нейтрализации будет определяться по отсутствию феноменов цитопатического действия, цветной пробы и т.д.

Серологический метод. Определяют нарастание титра антител в парных сыворотках. Берется известный антиген, известный вирус соединяются с сывороткой больного и ищем будут ли нейтрализовать вирус и опять исчезнут все феномены его присутствия в культуре ткани или не лабораторном животном.

ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА ПОЛИОМИЕЛИТА.  Специфического лечения полиомиелита нет. Нет и химиопрепаратов, антибиотиков которые могут помочь при паралитической форме. Возможны симптоматические, общеукрепляющие мероприятия.

  Существуют 2 вакцины:

  •  Вакцина Солка разработанная в 1956 году и названная инактивированная полиомиелитная вакцина (ИПВ). Это убитая вакцина, она дает общий гуморальный иммунитет, но не защищает кишечник. Человек, который привит этой вакциной не заболеет сам, но если у этого ребенка в кишечнике поселится вирус он может стать переносчиком вируса и заражать других.
  • В 1961 году был разработана ОПВ — ослабленная полиомиелитная вакцина. Эта вакцина является более надежной, так как она обеспечивает и местный и общий иммунитет. Содержит вирусы, которые живут в кишечнике, не давая вирулентным вирусам полиомиелита в нем заселяться. Недостатком этой вакцины является то, что при вакцинировании бывают осложнения. В первом случае на 1-10 млн.  сам вакцинный штамм вызывает полиомиелит у очень ослабленных детей с нарушением гематоэнцефалического барьера.

Можно сказать что с помощью этих 2-х вакцин проблема полиомиелита решена и дело только в проведении достаточных организационных мероприятий.

ЭНТЕРОВИРУСНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ КЛИНИКА ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ПРОФИЛАКТИКА- МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ- МУ 3-1-1-2130-06… Актуально в 2018 году

3.3.1. Безопасность работы в лаборатории, выполняющей диагностические исследования энтеровирусных инфекций

Согласно российским официальным нормативным документам, неполиомиелитные энтеровирусы отнесены к IV группе патогенности («Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности». СП 1.2.036-95). Правила устройства микробиологических лабораторий, получения разрешений на работу с микроорганизмами и безопасности работы регламентируются СП 1.2.006-93 и СП 1.2.731-99.

Выполнение диагностических исследований энтеровирусных инфекций допускается в лабораториях, организациях, структурных подразделениях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение и лицензию на выполнение работ с микроорганизмами III — IV групп патогенности.

Организация работы в лаборатории выполняется в соответствии с СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами».

Закон прост: В связи с утратой силы СП 1.2.731-99, следует руководствоваться принятыми взамен СП 1.3.2322-08.

Клинические материалы, которые используются для диагностических исследований энтеровирусных инфекций, могут быть инфицированы диким полиовирусом, поэтому при работе с ними необходимо соблюдать правила, изложенные в следующих нормативных документах:

— СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования материалов, инфицированных или потенциально инфицированных диким полиовирусом»;

Закон прост: Официальный источник электронного документа содержит неточность: СП 1.2.036-95 имеет название «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности».

— СП 1.3.1325-03 «Безопасность работы с материалами, инфицированными или потенциально инфицированными диким полиовирусом».

Основные рекомендации по работе лабораторий, выполняющих диагностические исследования энтеровирусных инфекций, содержатся в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005) и в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005).

Среди лиц, работающих с энтеровирусами, точно документированные случаи лабораторных заражений являются редкими. Это — или следствие несчастного случая, или несоблюдение соответствующих предосторожностей. Известен случай заноса дикого вируса полиомиелита в семью работником производства полиовирусной вакцины. Хорошее владение техникой работы и употребление различных защитных приспособлений значительно снижают этот риск. Наиболее частой причиной лабораторных заражений является вдыхание аэрозолей вируссодержащих материалов, образующихся при работе с пипетками, шприцами, при центрифугировании, а также контакт с зараженными животными.

Работников, осуществляющих работу с инфекционными материалами, нужно инструктировать о необходимости обращения к врачу в случае заболевания лихорадочного типа. Следует периодически брать пробы крови у персонала и хранить сыворотки в замороженном виде для серологических исследований в случае заболевания. Для каждой лаборатории в соответствии с конкретными условиями работы следует разработать руководство по технике безопасности. Основное внимание следует уделять необходимости сознательного и ответственного отношения к работе со стороны персонала, а также тщательному обучению правилам безопасности новых сотрудников, поскольку само по себе существование правил безопасности и защитных приспособлений еще не обеспечивает предупреждения лабораторных заражений.

Санитарными правилами СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами» определяются требования к организации работы, включая требования к помещениям и оборудованию лабораторий, проведению работ в лаборатории, средствам индивидуальной защиты, содержанию животных, обеззараживанию материала и уборке помещений, мероприятиям по ликвидации аварий и организации контроля за выполнением требований биологической безопасности. В этих санитарных правилах предписаны режимы обеззараживания различных зараженных материалов (поверхностей рабочих столов, стен и полов помещений, защитной одежды, лабораторной посуды и вируссодержащих материалов, инструментов). В этих правилах предписываются также режимы дезинфекции предметов, которые могут быть контаминированы выделениями больных людей (одежда, обувь, белье, посуда, жидкие отходы, посуда из-под выделений, санитарно-техническое оборудование, уборочный материал, мусор, транспорт). Рекомендуются также средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности и бактериологический метод контроля эффективности работы парового стерилизатора.

3.3.2. Правила забора и транспортирования материалов от больных для проведения вирусологических исследований

Для подтверждения вирусной этиологии заболевания необходимо проведение лабораторного исследования, эффективность которого зависит от правильного сбора соответствующих материалов (тканей, фекалий, носоглоточных смывов, крови, везикулярной жидкости, спинно-мозговой жидкости) и транспортирования их в лабораторию. Все пробы для выделения вируса необходимо брать с соблюдением соответствующих предосторожностей для исключения контаминации одной пробы материалом другой пробы этого же больного или материалом пробы другого обследуемого. Для успешного лабораторного исследования необходимо производить как можно более ранний отбор проб.

Забор материалов осуществляется медицинскими работниками лечебно-профилактического учреждения, куда госпитализирован больной. Для отбора проб используют стерильную стеклянную или пластиковую посуду.

Две пробы фекалий для выделения вируса отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней, с интервалом 24 — 48 ч.

Носоглоточные/глоточные смывы отбирают в первые 3 — 4 дня от начала заболевания. Для получения носоглоточного/глоточного смыва можно использовать стерильную дистиллированную воду, бульон или солевой раствор. Отбор материала с помощью глоточного тампона производят в те же сроки. Тампоном протирают заднюю стенку глотки, миндалин и небных дужек. Тампоны помещают в пробирку с 1 — 2 мл раствора Хэнкса; пробу исследуют сразу или хранят в замороженном виде.

Спинно-мозговую жидкость берут в первые дни болезни в асептических условиях стерильным шприцем только по клиническим показаниям.

Пробы крови для серологической диагностики следует брать утром натощак. На всех этапах взятия и обработки крови принимают меры для предотвращения гемолиза. Первую пробу крови (5 мл) берут как можно раньше после начала болезни, вторую — на 3 — 4-й неделе, в стадии реконвалесценции. Параллельно кровь исследуют на выделение вируса — возбудителя болезни.

В случае летального исхода для исследования проводят забор секционного материала (ткани головного, спинного и продолговатого мозга и варолиева моста, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки). При необходимости исследованию подвергают и другие материалы — ткань сердечной мышцы, печени, легких, селезенки, почек, лимфатических узлов, глаза и т.д. Пробу нужно брать как можно раньше после смерти. Ткани берут в заранее намеченном порядке, чтобы избежать их контаминации содержимым желудка и кишечника. Для иссечения тканей пользуются стерильными инструментами (отдельный набор для каждой пробы). Объем каждой пробы (кусочка) из тканей центральной нервной системы должен составлять примерно 1 куб, см; из толстой кишки иссекается сегмент длиной 3 — 5 см, содержащий фекальные массы.

Собранные пробы немедленно отправляют в лабораторию. Все пробы, кроме фекалий, спинно-мозговой жидкости и крови, сразу же после взятия помещают в транспортировочную среду. Если отправка проб задерживается, их помещают в холодильник при температуре 4 — 8 °C. Если время до отправки превышает 24 ч, пробы замораживают при температуре -20° или ниже. Следует сохранять их замороженными до получения лабораторией. Сыворотки без добавления консервантов хранят в замороженном виде. Повторное замораживание и оттаивание сывороток (больше 4 раз) может оказывать неблагоприятное влияние на титр антител.

Пробы помещают в пластиковые мешки так, чтобы избежать протечек и повреждений. Все материалы должны сопровождаться соответствующими документами — направлением на исследование с указанием наименования учреждения, адреса, телефона, адреса электронной почты, факса и сопроводительными документами, содержащими основные сведения о больном.

Транспортирование проб осуществляют с соблюдением условий «холодовой цепи» в термоконтейнерах или термосах, обеспечивающих эти условия. При транспортировании проб руководствуются санитарными правилами «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности. СП 1.2.036-95».

При отборе, хранении и транспортировании проб руководствуются основными методическими документами:

— «Рекомендации по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005);

— «Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005).

3.3.3. Выделение энтеровирусов

Основными методами лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции являются выделение вируса (в культуре клеток или на животных) и обнаружение РНК энтеровирусов с помощью ПЦР. Выделение вируса хотя и требует большего времени, дает наиболее однозначный ответ на вопрос об этиологии заболевания и позволяет использовать выделенный вирус для последующих эпидемиологических исследований. ПЦР обладает большей чувствительностью, большей быстротой и позволяет выявлять вирусы, не размножающиеся в культуре клеток. ПЦР используют при исследовании спинно-мозговой жидкости и материалов из верхних дыхательных путей.

3.3.3.1. Культуры клеток

Универсальной культуры клеток (или культуральной системы), пригодной для выделения всех энтеровирусов, не существует. Некоторые штаммы энтеровирусов не обладают цитопатогенностью ни для одной из известных культур клеток и могут быть выделены только с использованием чувствительных лабораторных животных, что достаточно сложно в условиях практической лаборатории. Обобщенные сведения о чувствительности наиболее распространенных в лабораториях перевиваемых культур клеток к различным энтеровирусам представлены в табл. 6.

Таблица 6

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК К РАЗЛИЧНЫМ ЭНТЕРОВИРУСАМ

Вирусы Проявление цитопатического эффекта на культуре клеток
RD HEp-2 L20B BGM
Полиомиелита 1 — 3 + + + +
ЕСНО + +/-
Коксаки A +/-за исключением неразмножающихся A1, A19, A22 (Коксаки A 2 — 6, 8, 10, 14)
Коксаки B + +
Энтеровирусы 68 — 71 +/-

Для увеличения вероятности выделения энтеровируса из исследуемого материала целесообразно использовать не менее двух видов культур клеток, одной из которых должна быть культура клеток RD.

Эффективность исследования материала зависит от состояния клеточных культур: клетки должны сохранять высокую чувствительность к энтеровирусам, аутентичность, стабильность и быть свободными от загрязнения микроорганизмами (простейшими, бактериями, грибами, дрожжами, микоплазмами, вирусами).

Культуры клеток должны быть получены из аттестованного официального источника. Подробные рекомендации по работе с культурами клеток изложены в «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005).

3.3.3.2. Подготовка проб для исследования в культуре клеток

Пробы фекалий. Готовят 10 — 20%-ю суспензию фекалий в сбалансированном солевом растворе (ФСБ) с антибиотиками. Пробы обрабатывают хлороформом, к действию которого устойчивы энтеровирусы. Такая обработка позволяет избавиться от бактериального и грибкового загрязнения пробы, удаляет потенциально токсичные липиды, способствует диссоциации вирусных агрегатов.

В маркированную центрифужную пробирку последовательно добавляют 10 мл ФСБ с антибиотиками, 1 г стеклянных бус и 1 мл хлороформа. Вносят примерно 2 г фекальной пробы, плотно закрывают пробирку и интенсивно встряхивают в течение 20 мин. Центрифугируют с охлаждением в течение 20 мин. при 1500 g. Надосадочную жидкость отбирают для исследования. (Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита. 4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005.)

Тампоны. Тампоны встряхивают в транспортировочной среде для высвобождения клеточного материала, избегая образования аэрозолей. Полученную суспензию обрабатывают хлороформом, как описано выше.

Спинно-мозговая жидкость. Пробы спинно-мозговой жидкости используют для исследования без дополнительной обработки. Если проба мутная, ее осветляют центрифугированием при 1600 — 2000 g в течение 10 мин.

Тканевые пробы. Готовят 10 — 20%-ю тканевую суспензию. Для этого ткани растирают в стерильной ступке, добавляя при необходимости стерильный песок и небольшое количество транспортировочной среды. Суспензию осветляют центрифугированием при 1600 — 2000 g в течение 10 мин.

3.3.3.3. Выделение и идентификация вирусов на культуре клеток

При выделении энтеровирусов с помощью чувствительных культур клеток следует руководствоваться принципами, изложенными в «Рекомендациях по эпидемиологическому надзору за энтеровирусами для поддержки программы ликвидации полиомиелита» (ВОЗ, Женева, 2005), «Руководстве по лабораторным исследованиям полиомиелита» (4-е издание. ВОЗ, Женева, 2005), МУ 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов» (Москва, 2006).

Энтеровирусы обычно идентифицируют в реакциях нейтрализации инфекционности, связывания комплемента, преципитации, иммунофлюоресценции или подавления гемагглютинации. Проведение всех этих реакций возможно лишь при наличии диагностических типоспецифических иммунных сывороток высокого титра. Наиболее чувствительным, специфичным и распространенным способом идентификации является реакция нейтрализации инфекционности.

В основе реакции нейтрализации инфекционности лежит взаимодействие исследуемого вируса с гомологичной сывороткой (или смесью антисывороток), которая нейтрализует вирус, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток. В опыте по нейтрализации вирусную суспензию, содержащую 100 ТЦД_50, смешивают в равном объеме с диагностическими сыворотками. После инкубации в течение 1 — 2 ч при 37 °C смесь вводят в культуры клеток. Иммунная сыворотка, которая предотвращает развитие ЦПЭ, указывает на тип вируса.

При постановке реакции нейтрализации для идентификации выделенного агента руководствуются вышеуказанными методическими документами.

3.3.4. Серологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

В сыворотке пациента можно обнаружить специфические антитела (нейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, подавляющие гемагглютинацию). Диагностика отдельных случаев заболевания только серологическими методами требует большого количества исследований со всеми известными серотипами энтеровирусов, поэтому ее предпринимают только при наличии данных, позволяющих предполагать тип этиологического агента (характерной клинической картины болезни, выделения и идентификации энтеровируса от больного, наличия вспышки заболеваний, вызванных установленным типом вируса).

Определение антител проводят с диагностической целью или при изучении эпидемиологических аспектов инфекции.

Для диагностических целей необходимы, по крайней мере, две пробы сыворотки, первую из которых берут как можно раньше после начала болезни, а вторую — через 2 — 3 недели после первой. Диагноз инфекции подтверждается значительным подъемом титра специфических антител во второй пробе. Диагностически значимым считают 4-кратный и больший подъем титра антител.

Для эпидемиологических исследований достаточно одной пробы сыворотки от каждого обследуемого; внимание следует обращать на правильный отбор обследуемых лиц и компоновку групп, чтобы получить наиболее представительные результаты.

В настоящее время для серологической диагностики используют преимущественно реакцию нейтрализации инфекционности. Другие методы выявления антител (реакцию связывания комплемента, преципитацию в агаре, подавление гемагглютинации) используют редко. В основе определения титров антител с помощью реакции нейтрализации лежит принцип взаимодействия известного вируса с гомологичными антителами, присутствующими в сыворотке, что проявляется в виде отсутствия ЦПЭ на культуре клеток.

Разведения сыворотки (двукратные или пятикратные до, приблизительно, 1:2500) смешивают с равными объемами разведения вируса, содержащего 100 ТЦД_50, в том объеме смеси, который будет введен в культуру при заражении. Смесь выдерживают 2 ч при 37 °C и вносят в 2 — 3 пробирки или лунки с культурой клеток. Контроль должны включать: а) наименьшее (1:4) разведение сыворотки для проверки токсичности; б) контроль качества клеток со средой; в) титрование рабочей дозы вируса. Титром сыворотки считают наибольшее разведение, защищающее 50% зараженных культур от действия 100 ТЦД_50 вируса.

3.3.5. Молекулярно-биологические методы диагностики энтеровирусных инфекций

Основные сведения об использовании молекулярно-биологических методов для индикации и идентификации энтеровирусов изложены в Методических указаниях 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов».

Разработанные в последние годы молекулярно-биологические методы индикации и типирования энтеровирусов позволяют выявить наличие энтеровирусных геномных последовательностей в исследуемом материале уже через несколько часов после начала работы и установить их типовую принадлежность в большинстве случаев уже через 2 — 3 дня.

Обязательным условием для получения достоверных результатов при проведении молекулярно-биологической диагностики является наличие квалифицированного персонала.

Набор помещений и оборудования (ОТ-ПЦР, электрофорез), организация работы должны исключать возможность случайной контаминации исследуемых проб.

Главное преимущество молекулярно-биологических методов — быстрота и достоверность выявления и типирования возбудителей. Это создает возможность раннего этиологического диагноза и экономию на средствах лечения и длительности пребывания в стационаре (например, при снятии диагноза бактериального менингита или сепсиса). При быстрой постановке этиологического диагноза возможно проведение быстрой специфической профилактики (например, введение гамма-глобулина при вспышках энтеровирусного менингита или увеита).

Главным недостатком традиционных методов выделения и типирования энтеровирусов является их длительность.

Быстрота и специфичность определения принадлежности возбудителя могут иметь исключительно важное значение при изучении вспышек заболеваний («молекулярная эпидемиология»). Создается надежная основа для быстрого и точного установления источников инфекции, времени и путей распространения возбудителя, влияния бытовых условий, соблюдения режимов санитарии в больницах, эффективности проведения профилактических мероприятий.

Наиболее часто ОТ-ПЦР используют для диагноза энтеровирусной инфекции путем прямого выявления последовательностей геномной РНК вируса в клинических пробах. Имеется множество модификаций методики, но все методы, способные установить родовые последовательности энтеровирусов, имеют несколько общих узловых характеристик. Наиболее важной из них является использование праймеров для 5′ нетранслируемой области вирусного генома. Опубликованы последовательности многих праймеров, специфичных для различных последовательностей этого региона у разных групп энтеровирусов. Однако значительная часть праймеров не проверена на достаточно большом числе штаммов, выделенных из клинических материалов, чтобы проконтролировать их реактивность со всеми серотипами и штаммами и поэтому не оценена достаточно хорошо для использования в диагностике. Главным преимуществом панэнтеровирусной ОТ-ПЦР является быстрое выявление энтеровируса даже с малым количеством исследуемого материала (как, например, СМЖ) и вирусов, которые не размножаются в культурах клеток. Главным недостатком ОТ-ПЦР-диагностики является вариабельность результатов, зависящая главным образом от природы исследуемой пробы. Хотя в некоторых случаях ОТ-ПЦР способна уловить единичные копии вирусной РНК, иногда ее чувствительность оказывается намного ниже, например, при исследовании проб кала (но все же не ниже чувствительности культур клеток).

Молекулярное типирование энтеровирусов основано на ОТ-ПЦР и определении нуклеотидной последовательности в области генома, кодирующей белок капсида VP1. Серотип исследуемого изолята определяют сравнением полученных последовательностей с имеющимися в генном банке последовательностями прототипных энтеровирусов человека. Этот метод несоизмеримо ускоряет типирование и может быть использован для идентификации изолятов, которые трудно или невозможно типировать, используя обычные иммунологические и вирусологические методы. Метод особенно полезен для оценки родства штаммов во время вспышек.