Пцр на коклюш результат

Коклюш – острое инфекционное заболевание органов дыхания, основным проявлением которого является длительный приступообразный кашель. Болеют коклюшем люди любого возраста – у кого нет достаточного иммунитета после вакцинации, тот в зоне риска. Однако тяжелее всего переносят недуг маленькие дети, у них часто возникают осложнения со стороны нервной системы, расстройства дыхания и кровообращения. Своевременная диагностика коклюша в большинстве случаев позволяет избежать затягивания болезни и развития осложнений.

Оглавление:   1. Почему важно своевременно диагностировать коклюш  2. В каких случаях показано обследование на коклюш  3. Анализы при подозрении на коклюш  - Бактериологический анализ отделяемого глотки на коклюш  - Выявление возбудителя коклюша методом ПЦР  - Определение концентрации специфических антител в крови   - Общий анализ крови при коклюше  4. Стоимость анализов на коклюш  5. Где можно сдать анализы на коклюш  

Почему важно своевременно диагностировать коклюш

Коклюш вызывают бактерии Bordetella pertussis. Они выделяются больным в окружающую среду во время кашля и чихания на протяжении практически всей острой фазы болезни (в среднем 20 дней). С этими микроорганизмами можно бороться с помощью антибиотиков, однако чтобы был эффект, лечение должно быть назначено на ранней стадии заболевания. Вообще в течении коклюша выделяют четыре периода:

  • инкубационный (длится 10-14 суток от момента заражения) – время, необходимое микроорганизму для проявления своих патогенных свойств;
  • продромальный или катаральный (длится 3-14 дней) – появляются первые признаки болезни, не отличающиеся особо от таковых при обычном ОРЗ, – сухой кашель, субфебрильная температура;
  • спазматический (длится 4-6 недель) – период специфического коклюшного кашля:
  • фаза реконвалесценции – восстановления и выздоровления.

По клинической картине диагностировать коклюш можно только в третьем периоде заболевания, но для начала специфической антибактериальной терапии, позволяющей остановить прогрессирование патологии, это уже поздно. Оптимальное время для лечения антибиотиками – первая неделя заболевания, то есть продромальный период. Отсюда выплывает первое преимущество своевременной диагностики коклюша – возможность проведения специфического лечения болезни.

Если коклюшем заболеет маленький ребенок (до года), которому не были сделаны противококлюшные прививки, течение недуга будет очень тяжелым. У таких деток возникают серьезные осложнения со стороны нервной, сердечно-сосудистой и респираторной системы, требующие оказания помощи в условиях реанимации.

К сведению! По данным Американского центра по контролю за инфекционными болезнями, ежегодно в мире коклюшем заболевает приблизительно16 млн. человек, около 200 тис.   случаев недуга заканчивается летально, большинство умирающих – малыши первого года жизни.

У детей постарше, не прошедших курс вакцинации, риск тяжелого течения коклюша ниже, но есть. У больных может развиться пневмония, ателектаз легкого, энцефалопатия, судороги. Однако если заболевание будет выявлено своевременно, врачи смогут приложить все усилия для стабилизации состояния пациента и недопущения возникновения осложнений – это второе преимущество своевременной диагностики коклюша.

У правильно вакцинированных детей, подростков, взрослых людей коклюш, как правило, не развивается, а если и развивается, то в виде стертой или малосимптомной формы болезни. Такие больные представляют не меньшую опасность для окружающих, чем больные с явными признаками коклюша, поскольку и первые, и вторые выделяют инфекцию в окружающую среду с кашлем. Если же заболевание будет выявлено и будет начата антибиотикотерапия, заразность больного резко снизиться, соответственно другие члены семьи (особенно маленькие дети) не будут подвергаться риску инфицирования опасной бактерией. Это еще одно преимущество ранней диагностики коклюша.

В каких случаях показано обследование на коклюш

Лабораторное обследование на коклюш рекомендуется проводить следующим категориям населения:

  • детям, кашляющим более 5-7 дней (особенно если кашель имеет приступообразный характер);
  • лицам, которые тесно контактировали с больным коклюшем дома, в садике, в школе, на работе;
  • взрослым с подозрением на коклюш (особенно если в семье есть грудные дети или же если больной является работником детского учреждения).

Важно

Роль взрослых в распространении коклюша среди детей очень высокая – это доказали многочисленные научные исследования. У взрослых болезнь протекает зачастую как затянувшееся ОРЗ, а кашель не имеет характерных для рассматриваемого заболевания черт. Поэтому многие врачи и сами больные не задумываются о коклюше, считая его исключительно детской болезнью. В таких ситуациях пролить свет на истинную причину недомогания может только лабораторная диагностика.

Анализы при подозрении на коклюш

Диагностика коклюша проводится следующими методами:

  • бактериологическим (посев на питательные среды);
  • молекулярно-генетическим (обнаружение ДНК возбудителя коклюша);
  • серологическим (определение концентрации в крови специфических антител).

Для каждого из этих исследований есть свои сроки проведения, если их не соблюдать информативность и достоверность анализа значительно понижается.

Бактериологический анализ отделяемого глотки на коклюш

пцр на коклюш результатОптимальный срок для забора материала на бактериологический анализ – это 5-7 дни болезни. Если недуг длится 3 и более недель – исследование будет малоинформативным. Кроме того, материал должен быть взят до начала антибиотикотерапии, в ином случае возможны ложноотрицательные результаты, при которых роста микроорганизмов на питательных средах нет, а инфекционное заболевание есть. Чтобы повысить достоверность бактериологического исследования, его проводят двукратно, например, на 5 и 6 дни болезни.

В лабораторных условиях возбудителя коклюша выращивают на искусственных средах, которые отличаются от естественной среды обитания данной бактерии. Поэтому очень важно, чтобы в ходе забора материала медицинский работник смог захватить как можно больше биомассы микроорганизма из глотки пациента. Для этого перед походом в лабораторию обследуемый не должен чистить зубы, кушать, пить, полоскать рот и горло. Если это условие нарушено, сдавать материал можно будет не ранее чем через 2-3 часа.

Выделения для анализа на коклюш забирают специальным тампоном с задней стенки глотки в инфекционной больнице или прямо в лаборатории. Далее материал сеют на питательные среды, в которых хорошо растет и размножается возбудитель коклюша. Есть еще один метод забора слизи для исследования – открытую чашку с питательной средой подносят непосредственно ко рту обследуемого во время кашлевого приступа.

Предварительный результат бактериологического анализа можно получить уже на 2-3 день после посева, а заключительный – только через 5-7 суток. Bordetella pertussis на искусственных средах растет достаточно медленно, поэтому бактериологом необходимо время для точной идентификации микроорганизмов.

Выявление возбудителя коклюша методом ПЦР

Материалом для данного исследования служит соскоб с задней стенки глотки. Эффективность метода ПЦР в диагностике коклюша является самой высокой (около 80%), ложноотрицательные результаты встречаются редко. Проводится такой анализ в первые 3-4 недели заболевания, то есть когда в слизистой дыхательных путей еще присутствует Bordetella pertussis.

Особенности подготовки: нельзя чистить зубы, кушать и пить минимум за 2-3 часа до исследования, непосредственно перед взятием материала можно пополоскать рот кипяченой водой.

Определение концентрации специфических антител в крови

Серологическое исследование применяется для диагностики коклюшной инфекции на поздних сроках ее развития – приблизительно с 3 недели заболевания. В это время описанные выше методы оказываются малоэффективными, поскольку возбудителя в дыхательных путях уже нет, а сохранение кашля связано с остаточными воспалительными явлениями и перевозбуждением кашлевого центра в головном мозге.

В ходе серологической диагностики коклюша определяют титры антител к антигенам Bordetella pertussis трех классов:

  • иммуноглобулины М – появляются на 2 недели заболевания;
  • иммуноглобулины А – синтезируются с 2-3 недели;
  • иммуноглобулины G – обнаруживаются только после 3 недели недуга.

пцр на коклюш результатОсновным методом серологической диагностики коклюша является иммуноферментный анализ (ИФА). Исследуемый материал – венозная кровь. Подготовка к сдаче крови должна быть такой же, как и перед другими анализами: приходить в лабораторию необходимо утром натощак, за 12 часов до исследования желательно исключить физические нагрузки и не принимать лекарственные средства, если это возможно.

Особенностью серологической диагностики коклюша является необходимость в исследовании парных сывороток, то есть проведении двух анализов с промежутком в 10-14 дней. Такая тактика дает возможность выявить нарастание титров антител, которое говорит в пользу развивающегося заболевания, а не иммунитета, приобретенного вследствие ранее перенесенного коклюша или вакцинации.

Важно

Согласно рекомендациям ВОЗ подтверждением наличия коклюша у невакцинированных от этой инфекции детей является нарастание уровня антител Ig М и Ig А к одному или нескольким антигенам Bordetella pertussis. Для оптимальной лабораторной диагностики одновременно должны использоваться два метода исследования: бактериологический посев и серологический анализ крови.

Общий анализ крови при коклюше

Данный метод исследования не является специфическим и не может подтвердить или опровергнуть диагноз «Коклюш». Единственное предназначение этого анализа – выявление воспалительного процесса и коррекция плана дальнейшего обследования. Врач может заподозрить коклюш при наличии у пациента соответствующей клинической картины и высокого лимфоцитоза и лейкоцитоза в результате общего анализа крови.

Стоимость анализов на коклюш

Обратите внимание

Цены могут существенно отличаться в каждом из городов РФ.

В частных клиниках и лабораториях бактериологическое исследование на коклюш стоит в среднем 1,5 тыс. рублей. Определение титра антител к коклюшу обойдется по 750-800 рублей за каждый иммуноглобулин. Приблизительно такая же цена и у анализа глоточного соскоба на коклюш методом ПЦР. Дополнительно оплачивается услуга по забору материала: мазки и соскобы – 300-400 рублей, взятие венозной крови – 100-150 рублей.

Где можно сдать анализы на коклюш

Решать, какие исследования необходимо пройти больному, должен врач с учетом клинической картины заболевания, возраста пациента и эпидемических данных (были ли контакты с больными коклюшем и т.д.). Поэтому сначала следует обратиться именно к нему, а не идти прямиком в лабораторию.

С направлением врача сдать кровь и мазки на коклюш можно в государственных и частных медицинских учреждениях. При этом необходимо учитывать, что не все коммерческие лаборатории предоставляют полный комплекс исследований на коклюш – многие не проводят бактериологический анализ. С результатами обследования необходимо опять-таки идти к своему лечащему врачу, только он сможет грамотно интерпретировать полученные данные и назначить лечение.

Зубкова Ольга Сергеевна, медицинский обозреватель, врач-эпидемиолог

2,541 просмотров всего, 3 просмотров сегодня

(

голос., средний:

из 5)

Цель бактериологического исследования — выявление и изучение инфекционных агентов в исследуемом биоматериале.

Узнать подробнее…

При бактериологическом исследовании биоматериал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию как можно скорее.

Адреса…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Подробнее…

Современные методики лабораторной диагностики инфекций позволяют выявить болезнь на раннем этапе, в том числе при отсутствии симптомов.

Узнать подробнее…

Существенно сэкономить на медицинском обследовании помогут акции и специальные предложения.

Акции и скидки…

Многие считают, что коклюш — детская инфекция, редко встречающаяся и легко протекающая. В действительности и коклюш, и паракоклюш становятся все более серьезной проблемой в мире из-за тяжелого течения и наличия атипичных, или стертых, форм. В этой статье мы расскажем, как вовремя распознать это непростое заболевание.

Чем опасен коклюш и почему так важна его оперативная диагностика

Коклюш — острое инфекционное заболевание, поражающее преимущественно детский организм и сопровождающееся спазматическим кашлем. Инфекция передается воздушно-капельным путем: при кашле, чихании и даже во время разговора.

Коклюш вызывает бактерия Bordetella pertussis, которая попадает в дыхательные пути и прикрепляется к клеткам эпителия. В результате микроскопические реснички, помогающие выводить мокроту и очищать бронхи, повреждаются. Бактерия начинает размножаться и выделять несколько видов токсинов, которые и приводят к появлению симптомов.

Справка
Впервые бактерия-возбудитель коклюша описана в 1906 году французским ученым О. Жангу и бельгийским иммунологом и бактериологом Ж. Борде, по имени которого и названа.

Первый симптом коклюша — ночной кашель. Постепенно он усиливается и появляется днем. Так может продолжаться до двух недель. Со временем состояние ухудшается, кашель становится спастическим, или спазматическим. Во время приступа человек с трудом может вдохнуть, напрягается, лицо становится красным или даже синеватым, появляется ощущение нехватки воздуха. Приступ такого мучительного кашля иногда заканчивается рвотой или выделением очень густой стекловидной мокроты.

Проблема своевременной диагностики заключается в том, что патология начинается с незначительных симптомов. Сухое покашливание ночью или перед сном напоминает кашель при ОРВИ. Температура тела больного может как незначительно повыситься на несколько дней, так и остаться нормальной. Общее самочувствие инфицированного почти не страдает. И только когда появляются более серьезные симптомы, врачи начинают задумываться о полноценной лабораторной диагностике коклюша.

Еще в начале прошлого столетия коклюш считался одной из самых опасных инфекций, он ежегодно становился причиной смерти тысяч детей. Но даже на современном уровне развития медицины коклюш может протекать очень тяжело.

Кстати
Контактный (например, через игрушки) путь передачи коклюша невозможен, поскольку бактерия Bordetella pertussis быстро погибает во внешней среде.

Исследования, проведенные в 2000-е годы, указывают на значительное увеличение за последнее десятилетие доли тяжелых и среднетяжелых случаев коклюша. Если в 1990-х годах регистрировалось только 18,6% тяжелых форм болезни, то в 2000-е — уже 43,2%.

Токсины, которые выделяет возбудитель коклюша, поражают дыхательный центр в головном мозге. Из-за этого возникает нарушение дыхания, в крови становится меньше кислорода, увеличивается содержание углекислого газа. Возникает гипоксия — кислородное голодание. Поражаются сосуды, развивается повреждение головного мозга (энцефалопатия). В крови увеличивается количество лимфоцитов и лейкоцитов.

К осложнениям коклюшной инфекции относят ателектаз легкого (сближение и сжатие стенок легкого, сопровождающееся выходом воздуха с данного участка), кровоизлияния на коже и в конъюнктиву глаза, поражение сосудов, энцефалопатию, легочное сердце. Из-за снижения иммунитета часто присоединяется вторичная инфекция, развивается бронхит или пневмония.

Паракоклюш — острое инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Bordetella parapertussis. Она очень похожа по своему строению на возбудитель коклюша и поэтому вызывает практически такие же симптомы.

Раньше считалось, что паракоклюш — более легкое заболевание. Но последние исследования доказали, что он тоже может привести к тяжелому судорожному кашлю, рвоте и нарушению дыхания. Единственное клиническое отличие этого заболевания от коклюша — отсутствие повышения уровня лейкоцитов в крови.

Особо тяжелые последствия наблюдаются при заражении взрослых и подростков. По данным серологических исследований, проведенных в США, 12–21% взрослых с кашлем более 2 недель могут болеть коклюшем. В России ситуация примерно такая же. Согласно исследованиям ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, проведенным в очагах коклюша, после контакта с зараженным заболело 23,7% взрослых.

У подростков и взрослых коклюш часто протекает в атипичной или вовсе бессимптомной форме. При этом родители, старший брат или сестра с «обычным ОРВИ» являются серьезной угрозой для младших детей в семье. Поэтому так важно вовремя выявить инфекцию не только у малышей, но и у взрослых.

Какие анализы нужно сдавать при подозрении на коклюш

Существуют бактериологические, серологические и ПЦР-методы диагностики коклюша и паракоклюша. Биологический метод (посев материала из носоглотки и культивирование его на питательной среде) информативен на раннем этапе. В первые дни болезни он дает достоверный результат в 86–98% случаев. Но со временем показатели точности снижаются до 15–20%. Особенно если ребенок начинает принимать антибиотики.

«Золотым стандартом» диагностики коклюша является реакция иммуноферментного анализа (ИФА). Она позволяет выявить в сыворотке крови различные классы иммуноглобулинов. Это дает возможность врачу точно поставить диагноз, определить стадию инфекционного процесса, узнать насколько силен иммунитет к коклюшу.

Каждый из анализов на коклюш имеет свои особенности, показания, принципы интерпретации результатов. Давайте разберем их все.

Посев отделяемого носоглотки на микрофлору

Этот анализ проводят в катаральном периоде заболевания, то есть в первые дни появления кашля. Исследование назначают после контакта с больным коклюшем, особенно если у ребенка нет прививок или нет данных об их проведении.

Чувствительность теста колеблется в зависимости от качества и сроков исследования от 20 до 90%. При этом анализ выявляет и коклюш, и паракоклюш. В более поздний период заболевания и при приеме антибиотиков его результативность сильно снижается. Исследование проводится натощак, через 2–3 часа после питья или еды. Материал забирают в среднем на 5–7 день заболевания двукратно: два дня подряд или через день. Мазок берется с поверхности ротоглотки.

Биоматериал помещают в специальную емкость и направляют в лабораторию. Там проводится посев материала на питательную среду. Через несколько дней проводится микроскопическое исследование выросших колоний бактерий. Предварительный результат обычно можно получить на 3–5 день, окончательный — на 5–7 день.

Наличие Bordetella в организме говорит или о заболевании коклюшем (паракоклюшем), или о бессимптомном носительстве. Лечение необходимо в любом из этих случаев.

Клинический анализ крови

Исследование проводят при подозрении на инфекционное заболевание, при кашле, повышении температуры и практически при любых заболеваниях. Анализ может дать информацию о наличии воспаления в организме, но что послужило причиной, на его основании сказать нельзя.

Кровь забирают натощак и отвозят в лабораторию. Само исследование проводится или на специальном гемоанализаторе, или с помощью ручного подсчета клеток крови.

Результаты анализа крови при коклюше у детей нельзя анализировать без учета клинической картины и данных других методов исследования. При заражении коклюшной инфекцией значительно повышается количество лейкоцитов и лимфоцитов, при этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в пределах нормы. При паракоклюше повышения лейкоцитов не наблюдается.

Выявление антител к антигенам клеток Bordetella pertussis

При проведении анализа на антитела к коклюшу выявляют три вида иммуноглобулинов — IgA, IgG и IgM.

ИФА назначают при подозрении на коклюш, часто на поздних стадиях болезни, когда бактериологическое исследование уже неэффективно. То есть начиная со 2-3 недели заболевания. Диагностическая чувствительность этого метода — 66,6%, специфичность — 100%.

Забор крови проводится натощак, не раньше чем через 4 часа после последнего приема пищи. После этого из крови выделяют сыворотку, которая и является материалом для исследования. Собранный материал отправляется в лабораторию, где проводится серологический анализ на коклюш методом ИФА.

Исследование может быть как качественным (положительный/отрицательный результат), так и количественным (например, «титр 1:160»). Антитела IgM появляются в острой стадии коклюша примерно со второй недели заболевания. На 2–3 неделе обнаруживается IgA. На третьей неделе начинают образовываться антитела IgG. Именно они ответственны за формирование стойкого иммунитета. Интерпретировать результаты можно только в соответствии с клинической картиной, учитывая эпидемиологические и другие данные.

ПЦР-тестирование

Исследование можно проводить в течение первых 4-х недель заболевания. Чувствительность этого теста превосходит бактериологическое исследование во много раз. Специфичность метода —100%.

Мазок берется из носа или из ротоглотки. Забор материала желательно проводить натощак или через 2-3 часа после питья и еды. Предварительно полоскать рот не нужно.

В лаборатории в забранном материале определяются специфические участки ДНК бактерии, которая вызывает коклюш. Положительный результат говорит о заболевании коклюшем или о бактерионосительстве.

Не стоит самостоятельно выбирать тип анализа на коклюш, необходимо проконсультироваться со специалистом. И помните, на результат исследования влияет качество подготовки и проведения: техника взятия материала, условия транспортировки, состояние питательных сред.

Стоимость анализов на коклюш в частных клиниках

В среднем определение каждого типа иммуноглобулинов обойдется в 700–850 рублей. Бактериологический анализ на коклюш будет стоить уже дороже — от 850 до 1400 рублей. Ценовая разница при ПЦР-тестировании составляет от 300 до 800 рублей.

При этом стоит учесть расходы на взятие анализа крови (100–150 рублей) или мазка (200–250 рублей). Дополнительно клинический анализ крови с определением СОЭ будет стоить примерно 400–460 рублей.

Коклюш и паракоклюш — острые инфекции, которые легко маскируются под легкие заболевания. Только с помощью современных методов лабораторного исследования можно установить верный диагноз. А грамотный врач поможет интерпретировать полученные результаты и назначит лечение.

Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение, что позволяет значительно облегчить состояние больного и провести своевременные профилактические мероприятия, предотвратив заражение окружающих и контактных лиц. Анализ на коклюш с применением бактериологического метода исследования является основным в диагностике заболевания.

Однако опыт многих исследований доказывает, что для точной лабораторной диагностики заболевания необходимо использовать несколько взаимодополняющих методик. Наиболее эффективная комбинация — сочетание бактериологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Рис. 1. Спазматический приступообразный кашель — доминирующий симптомом коклюша у детей.

Клинические методы диагностики коклюша

Распознавание коклюша на ранних этапах развития заболевания претерпевает большие трудности, что связано с несколькими факторами:

  • Болезнь развивается медленно. Ее кульминация приходится на 2 — 3 неделю после возникновения первых симптомов заболевания.
  • Первичный токсикоз и выраженная температурная реакция вначале заболевания, так характерные для многих детских инфекционных заболеваний, при коклюше отсутствуют. Поэтому часто лабораторная диагностика запаздывает.
  • У привитых детей и взрослых чаще всего регистрируются атипичные формы заболевания, при которых меняется характеристика кашля (отсутствуют приступы спазматического кашля и репризы).

Критерии постановки диагноза коклюша в предсудорожный (катаральный) период:

  • Контакт с больными, у которых отмечается длительный кашель.
  • Медленное развитие заболевания. Нормальная или небольшая температура тела. Удовлетворительное состояние больного.
  • Отсутствие выраженных катаральных явлений.
  • Вначале покашливание, а потом упорный сухой кашель до перехода в приступообразный спазматический кашель длится 1 — 2 недели.
  • Эффект от симптоматической терапии отсутствует.
  • Хрипы в легких часто не выслушиваются. Высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
  • Обнаружение в посевах возбудителей коклюша (Bordetella pertussis).

Рис. 2. На фото бактерии Bordetella pertussis розового цвета под микроскопом (окраска по Граму). Коклюшные палочки короткие, коковидной формы, концы закруглены, длина составляет 0,5 — 2 мкм, в мазках располагаются отдельно, реже — попарно.

Рис. 3. Вид бактерий коклюша в электронный микроскоп.

к содержанию ↑Бактериологическая диагностика коклюша

Выделение возбудителей коклюша из носоглоточной слизи — классический метод лабораторного подтверждения заболевания. Высеваемость возбудителей редко достигает 80%. В среднем он не превышает 10 — 30%. Причиной этому являются:

  • Медленный рост коклюшных палочек на питательных средах.
  • Низкое качество питательных сред.
  • Позднее обследование больного.
  • Загрязнение исследуемого материала бактериальной флорой.
  • Погрешности при заборе исследуемого материала.
  • Применение антибиотиков до момента забора материала для бактериологического исследования.

Материалом для бактериологического исследования служит мазок из носовых ходов (обеих) и задней стенки носоглотки (не из гортани!).

Для взятия мазка применяется тампон из дакрона или используется метод «кашлевых пластинок».

Посев производится сразу на питательную или транспортную среды. На транспортной среде материал хранится не более одних суток. Предварительный ответ получается на 3 — 5 сутки. Окончательный ответ получается на 5 — 7 сутки.

Обследованию подлежат лица с подозрением на заболевание и лица, кашель у которых сохраняется более 7-и, но не более 30-и дней.

Рис. 4. На фото колонии Bordetella pertussis. Для культивирования используется среда Борде-Жангу (фото справа) или казеиново-угольный агар (фото слева). На этих средах формирование колоний происходит на 3 — 4 день после посева. Колонии микробов блестящие, серовато-кремовой окраски, напоминают по внешнему виду капельки ртути, имеют вязкую консистенцию. После снятия колоний с питательной среды остается сметанообразный след.

Рис. 5. При просмотре колоний Bordetella pertussis в световом микроскопе можно видеть, как колонии отбрасывают тень (световой конус).

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением ПЦР

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько единиц.

Методика определения ДНК Bordetella pertussis с помощью ПЦР была разработана в Новосибирске в 1999 году. Она имеет целый ряд преимуществ перед бактериологическим методом:

  • Высокая чувствительность данного метода. Даже наличие одного или нескольких возбудителей в пробе позволяет получить положительный результат.
  • Данный метод является высокоспецифичным. Удельный вес положительных результатов составляет 85 — 100%. Загрязнение вторичной микрофлорой не влияет на результат исследования.
  • Результат получается в течение 1-го дня.

Данный метод диагностики не заменяет культуральный метод.

Бактериологический метод и методика ПЦР являются взаимодополняющими и достоверными тестами при выявлении Bordetella pertussis.

Рис. 6. На фото виды колоний Bordetella pertussis.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением методики флюоресцирующих антител

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения Bordetella pertussis с помощью флюоресцирующих антител. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов. Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с помощью серологических реакций

Возбудители коклюша содержат вещества (антигены), способные вызвать иммунный ответ в организме инфицированного человека (образование антител). Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного. В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологического исследования оцениваются только с учетом клинической картины заболевания. Серологические методы используются так же для проведения эпидемиологического анализа.

Для диагностики коклюша используется несколько тестов:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены бактерий коклюша, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины классов G, M и A, уровень которых повышаются в крови после перенесенного заболевания или проведения иммунизации. Сывороточные иммуноглобулины M повышаются в ранние сроки заболевания, сывороточные иммуноглобулины G — в более поздние сроки.
  • Диагностика коклюша на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением экспресс-методов

Экспресс-методы лабораторной диагностики коклюша позволяют за несколько минут определить антигены в слизи задней стенки глотки.

При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты через 2 — 6 часов.

При использовании метода латексной микроагглютинации (ЛМА) антигены коклюшных бактерий выявляются через 30 — 40 минут.

Применение методов экспресс-диагностики увеличивают в несколько раз удельный вес лабораторно подтвержденных случаев заболевания.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с использованием гематологического метода

Изменения клеточного состава крови: высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ) чаще выявляются у невакцинированных детей.

В какой бы форме не протекал коклюш, сегодня врачи имеют возможность в ранние сроки провести лабораторную диагностику этого заболевания.

Рис. 8. На фото слева лейкоциты, справа — лимфоциты. При коклюше их количество значительно увеличивается.

к содержанию ↑Дифференциальная диагностика коклюша

Метод дифференциальной диагностики позволяет исключить целый ряд возможных заболеваний у больных и установить единственно правильный диагноз. Правильно проведенная дифференциальная диагностика коклюша позволяет своевременно назначить больному адекватное лечение, тем самым облегчив течение заболевания.

Коклюш следует дифференцировать от ОРВИ, паракоклюша, бронхита, бронхиальной астмы, наличия инородных тел в дыхательных путях, пневмоний, туберкулезного бронхоаденита и др.

  • Самые большие трудности представляет диагностика заболевания в катаральном периоде. Коклюш в этот период имеет много сходных черт с целой группой острых респираторных вирусных заболеваний, а так же с корью и паракоклюшем. Для коклюша в этот период характерен упорный, нарастающий кашель и отсутствие или слабая выраженность катаральных явлений верхних дыхательных путей. В этот период необходимо применять экспресс-методики и бактериологическую диагностику коклюша.
  • В период приступов спазматического кашля коклюш следует различать от острых респираторных заболеваний с обструктивным синдромом, острых вирусных заболеваний с преимущественным поражением нижних отделов респираторного аппарата, респираторного микоплазмоза, туберкулезного бронхоаденита, аспирации инородного тела, опухоли средостения, бронхолегочной формой муковисцидоза.

Рис. 9. Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз. А своевременное адекватное лечение позволит значительно облегчить состояние больного ребенка и провести профилактические мероприятия, тем самым предотвратив заражение контактных лиц.

  Статьи раздела «Коклюш»Самое популярное

ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?

Подпишитесь на нашу рассылку!

Коклюш – острая антропонозная инфекционная болезнь с воздушно-капельным механизмом передачи возбудителя, вызываемая коклюшным микробом и характеризующаяся длительным своеобразным спазматическим кашлем с поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем. Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella. Помимо B. pertussis респираторные инфекции у людей могут вызывать B.parapertussis и B.bronchiseptica.

B.parapertussis вызывает паракоклюш – заболевание, подобное коклюшу, но с более легким течением. Перекрестный иммунитет в отношении коклюша и паракоклюша отсутствует. B.bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез), протекающий как ОРВИ, возникающий при контакте с инфицированным животным, у людей с ослабленной иммунной системой может вызывать пневмонию. Выделяют типичные (кашель имеет приступообразный характер) и атипичные (отсутствует спастический кашель) формы коклюша. В течении типичных форм коклюша различают 4 периода: инкубационный (в среднем 14 дней), катаральный (1–2 недели), период спазматического кашля (4–6 недель) и период разрешения. Выраженность клинических проявлений зависит от тяжести заболевания, оцениваемой по: длительности катарального периода, частоте приступов кашля, наличию цианоза лица при кашле, гипоксии вне приступов кашля, степени нарушения работы сердечно-сосудистой системы, наличию и степени выраженности энцефалических расстройств. Диагноз коклюша считается подтвержденным, если имеется соответствие клиническому стандартному определению случая коклюша, лабораторное подтверждение и/или имеется эпидемиологическая связь с лабораторно подтвержденным случаем. Возможно сочетанное инфицирование с другими возбудителями ОРЗ, что отягощает течение болезни.

Показания к обследованию. Диагностика: больные с подозрением на коклюш и паракоклюш (в соответствии со стандартным определением случая*), а также длительно (5–7 дней и более) кашляющих, независимо от указаний на контакт с больными.

По эпидемическим показаниям: дети и взрослые в детских учреждениях, родильных отделениях и детских больницах, в которых были выявлены больные коклюшем.

Дифференциальная диагностика

  • Острые бронхиты, вызванные Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, вирусными возбудителями респираторных инфекций;
  • аспирация инородного тела;
  • муковисцидоз;
  • лимфогранулематоз.

Материал для исследований

  • Заднеглоточный мазок – культуральное исследование;
  • носоглоточный мазок – культуральное исследование;
  • мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки – выявление ДНК микроорганизмов;
  • гортанно-глоточные смывы – обнаружение АГ;
  • сыворотка крови – обнаружение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры бордетелл и определение их видовой принадлежности; выявление ДНК B.pertussis, B.parapertussis, B.Bronchiseptica методом ПЦР, выявление АГ B. pertussis в гортанно-глоточных смывах с использованием РНИФ; обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. При выявлении бордетелл выполняют выделение чистой культуры микроорганизмов и определение их видовой принадлежности методами микроскопии, постановкой РА с видоспецифическими сыворотками, проведением биохимических тестов и оценкой подвижности микроба. Культуральный метод характеризуются большой продолжительностью исследования, его диагностическая чувствительность не превышает 10–20%; аналитические характеристики во многом зависят от качества используемых сред (добавление крови животных является обязательным условием) и реагентов для иммунологических и биохимических идентификационных тестов.

Обнаружение ДНК методом ПЦР наиболее эффективно и востребовано для ранней диагностики, наибольшими диагностическими возможностями обладают методики, позволяющие обнаруживать и дифференцировать значимые для человека виды Bordetella с чувствительностью 5 x 102 – 1 x 103 ГЭ/мл исследуемого материала со специфичностью 100%.

Выявление АТ позволяет диагностировать коклюш на поздних сроках. Обнаружение специфических АТ проводят с использованием: РА для диагностики коклюша и паракоклюша, ИФА для обнаружения АТ (Ig M, A, G) к различным антигенам B.pertussis и B.parapertussis. Выявление специфических IgА методом РНИФ практически не используется по причине отсутствия стандартизации; чувствительность анализа, по данным авторов метода, варьирует в широком диапазоне от 103 до 105 микробных клеток в 1 мл, при этом положительные результаты исследования можно учитывать только при наличии типичной симптоматики коклюша.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Культуральное исследование с диагностической целью следует проводить в ранние сроки заболевания (1–2 недели болезни); в более поздние сроки высеваемость возбудителя резко снижается. Оптимальное время для обнаружения ДНК методом ПЦР – до 3-х недель от начала заболевания. Определение АТ целесообразно с 3-й по 6-ю недели от начала заболевания, далее титры АТ начинают снижаться. У детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только пробы крови, взятые в динамике (парные сыворотки), причем первый раз кровь берется не ранее чем через 3 недели от начала заболевания, повторно – спустя 2 недели.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Диагноз коклюша считается лабораторно подтвержденным в случае выделения культуры B.pertussis; обнаружения специфического фрагмента генома B.pertussis методом ПЦР; выраженной сероконверсии (увеличение в 4 и более раз уровня специфических IgG и/или IgA в парных сыворотках, или обнаружении у не привитого пациента специфических IgM). Диагностическим титром реакции агглютинации у не привитых и не болевших детей считают разведение 1:80. Необходимо учитывать, что у детей в возрасте до 3 месяцев могут присутствовать материнские АТ, но, как правило, в низких титрах. Диагноз коклюш, вызванный B.parapertussis, ставится в случае выделения культуры B.parapertussis или обнаружения специфического фрагмента генома B.parapertussis методом ПЦР, или при обнаружении АТ методом РА в титре не менее 1:80. Заболевание, вызванное B.bronchiseptica, диагностируется при выделении культуры или обнаружения специфического фрагмента генома методом ПЦР.

* Стандартное определение случая заболевания коклюшем – острое заболевание, характеризующееся: сухим кашлем с постепенным его усилением и приобретением характера приступообразного спазматического на 2-3 неделе заболевания, особенно в ночное время суток или после физической и эмоциональной нагрузки; явлениями апноэ, гиперемией лица, цианозом, слезотечением, рвотой, лейко- и лимфоцитозом в периферической крови, развитием «коклюшного легкого», жестким дыханием, отделением вязкой мокроты; незначительным повышением температуры.