Реакция агглютинации при коклюше

Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение, что позволяет значительно облегчить состояние больного и провести своевременные профилактические мероприятия, предотвратив заражение окружающих и контактных лиц. Анализ на коклюш с применением бактериологического метода исследования является основным в диагностике заболевания.

Однако опыт многих исследований доказывает, что для точной лабораторной диагностики заболевания необходимо использовать несколько взаимодополняющих методик. Наиболее эффективная комбинация — сочетание бактериологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 1. Спазматический приступообразный кашель — доминирующий симптомом коклюша у детей.

Клинические методы диагностики коклюша

Распознавание коклюша на ранних этапах развития заболевания претерпевает большие трудности, что связано с несколькими факторами:

  • Болезнь развивается медленно. Ее кульминация приходится на 2 — 3 неделю после возникновения первых симптомов заболевания.
  • Первичный токсикоз и выраженная температурная реакция вначале заболевания, так характерные для многих детских инфекционных заболеваний, при коклюше отсутствуют. Поэтому часто лабораторная диагностика запаздывает.
  • У привитых детей и взрослых чаще всего регистрируются атипичные формы заболевания, при которых меняется характеристика кашля (отсутствуют приступы спазматического кашля и репризы).

Критерии постановки диагноза коклюша в предсудорожный (катаральный) период:

  • Контакт с больными, у которых отмечается длительный кашель.
  • Медленное развитие заболевания. Нормальная или небольшая температура тела. Удовлетворительное состояние больного.
  • Отсутствие выраженных катаральных явлений.
  • Вначале покашливание, а потом упорный сухой кашель до перехода в приступообразный спазматический кашель длится 1 — 2 недели.
  • Эффект от симптоматической терапии отсутствует.
  • Хрипы в легких часто не выслушиваются. Высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
  • Обнаружение в посевах возбудителей коклюша (Bordetella pertussis).

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 2. На фото бактерии Bordetella pertussis розового цвета под микроскопом (окраска по Граму). Коклюшные палочки короткие, коковидной формы, концы закруглены, длина составляет 0,5 — 2 мкм, в мазках располагаются отдельно, реже — попарно.

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 3. Вид бактерий коклюша в электронный микроскоп.

к содержанию ↑Бактериологическая диагностика коклюша

Выделение возбудителей коклюша из носоглоточной слизи — классический метод лабораторного подтверждения заболевания. Высеваемость возбудителей редко достигает 80%. В среднем он не превышает 10 — 30%. Причиной этому являются:

  • Медленный рост коклюшных палочек на питательных средах.
  • Низкое качество питательных сред.
  • Позднее обследование больного.
  • Загрязнение исследуемого материала бактериальной флорой.
  • Погрешности при заборе исследуемого материала.
  • Применение антибиотиков до момента забора материала для бактериологического исследования.

Материалом для бактериологического исследования служит мазок из носовых ходов (обеих) и задней стенки носоглотки (не из гортани!).

Для взятия мазка применяется тампон из дакрона или используется метод «кашлевых пластинок».

Посев производится сразу на питательную или транспортную среды. На транспортной среде материал хранится не более одних суток. Предварительный ответ получается на 3 — 5 сутки. Окончательный ответ получается на 5 — 7 сутки.

Обследованию подлежат лица с подозрением на заболевание и лица, кашель у которых сохраняется более 7-и, но не более 30-и дней.

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 4. На фото колонии Bordetella pertussis. Для культивирования используется среда Борде-Жангу (фото справа) или казеиново-угольный агар (фото слева). На этих средах формирование колоний происходит на 3 — 4 день после посева. Колонии микробов блестящие, серовато-кремовой окраски, напоминают по внешнему виду капельки ртути, имеют вязкую консистенцию. После снятия колоний с питательной среды остается сметанообразный след.

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 5. При просмотре колоний Bordetella pertussis в световом микроскопе можно видеть, как колонии отбрасывают тень (световой конус).

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением ПЦР

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько единиц.

Методика определения ДНК Bordetella pertussis с помощью ПЦР была разработана в Новосибирске в 1999 году. Она имеет целый ряд преимуществ перед бактериологическим методом:

  • Высокая чувствительность данного метода. Даже наличие одного или нескольких возбудителей в пробе позволяет получить положительный результат.
  • Данный метод является высокоспецифичным. Удельный вес положительных результатов составляет 85 — 100%. Загрязнение вторичной микрофлорой не влияет на результат исследования.
  • Результат получается в течение 1-го дня.

Данный метод диагностики не заменяет культуральный метод.

Бактериологический метод и методика ПЦР являются взаимодополняющими и достоверными тестами при выявлении Bordetella pertussis.

реакция агглютинации при коклюше

Рис. 6. На фото виды колоний Bordetella pertussis.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением методики флюоресцирующих антител

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения Bordetella pertussis с помощью флюоресцирующих антител. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов. Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с помощью серологических реакций

Возбудители коклюша содержат вещества (антигены), способные вызвать иммунный ответ в организме инфицированного человека (образование антител). Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного. В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологического исследования оцениваются только с учетом клинической картины заболевания. Серологические методы используются так же для проведения эпидемиологического анализа.

Для диагностики коклюша используется несколько тестов:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены бактерий коклюша, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины классов G, M и A, уровень которых повышаются в крови после перенесенного заболевания или проведения иммунизации. Сывороточные иммуноглобулины M повышаются в ранние сроки заболевания, сывороточные иммуноглобулины G — в более поздние сроки.
  • Диагностика коклюша на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с применением экспресс-методов

Экспресс-методы лабораторной диагностики коклюша позволяют за несколько минут определить антигены в слизи задней стенки глотки.

При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты через 2 — 6 часов.

При использовании метода латексной микроагглютинации (ЛМА) антигены коклюшных бактерий выявляются через 30 — 40 минут.

Применение методов экспресс-диагностики увеличивают в несколько раз удельный вес лабораторно подтвержденных случаев заболевания.

к содержанию ↑Анализ на коклюш с использованием гематологического метода

Изменения клеточного состава крови: высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ) чаще выявляются у невакцинированных детей.

В какой бы форме не протекал коклюш, сегодня врачи имеют возможность в ранние сроки провести лабораторную диагностику этого заболевания.

Рис. 8. На фото слева лейкоциты, справа — лимфоциты. При коклюше их количество значительно увеличивается.

к содержанию ↑Дифференциальная диагностика коклюша

Метод дифференциальной диагностики позволяет исключить целый ряд возможных заболеваний у больных и установить единственно правильный диагноз. Правильно проведенная дифференциальная диагностика коклюша позволяет своевременно назначить больному адекватное лечение, тем самым облегчив течение заболевания.

Коклюш следует дифференцировать от ОРВИ, паракоклюша, бронхита, бронхиальной астмы, наличия инородных тел в дыхательных путях, пневмоний, туберкулезного бронхоаденита и др.

  • Самые большие трудности представляет диагностика заболевания в катаральном периоде. Коклюш в этот период имеет много сходных черт с целой группой острых респираторных вирусных заболеваний, а так же с корью и паракоклюшем. Для коклюша в этот период характерен упорный, нарастающий кашель и отсутствие или слабая выраженность катаральных явлений верхних дыхательных путей. В этот период необходимо применять экспресс-методики и бактериологическую диагностику коклюша.
  • В период приступов спазматического кашля коклюш следует различать от острых респираторных заболеваний с обструктивным синдромом, острых вирусных заболеваний с преимущественным поражением нижних отделов респираторного аппарата, респираторного микоплазмоза, туберкулезного бронхоаденита, аспирации инородного тела, опухоли средостения, бронхолегочной формой муковисцидоза.

Рис. 9. Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз. А своевременное адекватное лечение позволит значительно облегчить состояние больного ребенка и провести профилактические мероприятия, тем самым предотвратив заражение контактных лиц.

  Статьи раздела «Коклюш»Самое популярное

ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?

Подпишитесь на нашу рассылку!

Коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным болезням, возбудителем которых является коклюшная палочка (Bordetella parapertussis). Коклюш и паракоклюш практически ничем не отличаются друг от друга.

Основное различие – более легкое протекание второго заболевания в отличие от первого. Обе эти инфекции негативно отражаются на состоянии нервной системы, также происходит поражение дыхательных путей.

Наиболее характерной особенностью коклюша и паракоклюша является специфический приступообразный кашель, который может привести к отделению мокроты, а иногда к рвоте. Паракоклюш и коклюш являются одними из наиболее часто встречающихся инфекционных болезней среди детей.

Ребенок, который заболел коклюшем или паракоклюшем является заразным для других детей с первого дня заболевания. Чаще всего заражение этими заболеваниями происходит при контакте с другими заболевшими детьми в тесных детских коллективах, например, в детском садике или в школе. Именно поэтому болезнь имеет массовый характер.

Как и многие другие заболевания, свойственные именно детям, коклюш и паракоклюш то заболевание, которое переносится только один раз за всю жизнь.

Диагностирование заболевания

В настоящее время диагностика коклюша и паракоклюша представляет собой оценку всей картины заболевания и имеющихся симптомов. Особенное внимание уделяется исследованию слизи из носа и взятию мазков из носоглотки и ротоглотки. Также не остаются без внимания анализы крови, любых изменения в них должны быть выявлены врачом.

Так как коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным болезням, диагностируются они по обнаружению бактерии (коклюшной палочки) в исследуемом образце крови. Но наиболее часто признаки заболевания выявляются во время исследования мазков, так как в кровь бактерия проникает довольно редко.

Анализ крови на коклюш и паракоклюш

Для того чтобы точно установить наличие болезни, пациенту необходимо сдать анализ крови на коклюш и паракоклюш.

  1. Для начала нужно сдать кровь на проведение общего анализа. На этом этапе будет определено количество лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина. Коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным заболеваниям, поэтому при наличии коклюшной палочки будет замечено увеличение количества лейкоцитов, а также количества нейтрофилов, так как они отвечают за антибактериальный иммунитет. Остальные компоненты крови практически не меняются.
  2. Наиболее эффективным анализом на обнаружение коклюшной палочки является иммуноферментный анализ. Для его проведения у пациента с подозрением на коклюш или паракоклюш будет взят образец крови из вены. Данный анализ представляет собой выявление антител иммуноглобулинового белка к возбудителю заболевания. Его можно осуществлять не ранее, чем через три недели после начала болезни. Поэтому его основной задачей является скорее подтверждение диагноза, чем выявление заболевания.
  3. Также существует серологический метод анализа крови на выявление заболевания. Он основывается на определении количества антител к коклюшу и паракоклюшу, которые показывают наличие в организме инфекционного процесса.
  4. К различным видам анализа крови для выявления коклюшной бактерии относится и реакция агглютинации. С помощью реакции агглютинации производится обнаружение антител к антигенам возбудителя, который находится на начальной стадии течения болезни. К недостаткам такой процедуры можно отнести то, что на данный момент до сих пор не существует единого метода проведения реакции агглютинации. Поэтому значение полученных результатов можно воспринимать и расшифровывать по-разному.

Расшифровка результатов анализов

При выявлении коклюшной палочки в результате изучения анализа крови, можно говорить о том, что коклюшная палочка перешла на новый уровень развития. То есть существует не как локальное заболевание, а развивается на системном уровне. В таком случае, есть вероятность обширного размножения микроорганизма, так как кровь – отличная среда для успешного развития практически любого микроорганизма. Если рассматривать конкретно коклюшную палочку, то для этой бактерии единственной благоприятной средой для осуществления ее роста является кровь.

В случае распространения бактерии по организму может развиться синдром диссеминации. Его лечение довольно трудоемкий процесс и заканчивается не всегда хорошим результатом.

Если во время изучения результатов анализа крови было выявлено наличие в организме коклюшной палочки, то пациента необходимо в срочном порядке госпитализировать в реанимационное отделение для оказания медицинской помощи и назначения необходимого лечения. Это необходимо сделать как можно быстрее, так как существует довольно серьезная угроза жизни пациента.

Бывают случаи, когда результаты анализов оказываются ложноположительными. Такое явление часто встречается в результате персистирования в организме пациента антигенов коклюшной палочки (после уже вылеченного коклюша или паракоклюша).

Не так часто можно наблюдать ситуацию, когда происходит перекрестная реакция антигенов. Если в организме находится какая-либо другая граммотрицательная бактерия, то результат проведения анализа на выявление антител к коклюшу может быть определен как положительный.

В данной ситуации единственным методом диагностирования заболевания является ПЦР для выявления типа генетического материала, который мог спровоцировать организм на такую реакцию.

Особенности диагностики коклюша у детей

Часто встречаются случаи, когда показатели анализа крови у детей существенно отличаются от стандартных проявлений коклюша и паракоклюша.

Примерно на 2-4 неделе развития болезни можно наблюдать развитие иммунодефицита. Также существует большая вероятность присоединения оппортунистической инфекции. Поэтому диагностирование коклюша на ранних стадиях может быть затруднено, так как более сильно будут выделяться признаки какого-либо другого заболевания.

К тому же параллельное развитие какой-то другой инфекции может спровоцировать осложнения, из-за чего лечение коклюша и паракоклюша будет произведено не вовремя.

У некоторых пациентов могут быть замечены специфичные случаи. Даже после успешного лечения заболевания и избавления от всех симптомов, может оставаться тот же результат анализа крови.

Это наиболее свойственно довольно ослабленным детям, которые обладают иммунодефицитом. Происходит это за счет более долгого персистирования и медленно протекающей элиминации в организме ребенка антигенов бактерии Борде-Жангу.

Даже в случае перенесенного заболевания, в случае его правильной диагностики и лечении, результаты анализа крови должны прийти в норму. Нормальным считается состояние, когда лейкоцитоз выступает только как временное явление, которое не длится более чем 1,5 недели после полного излечения заболевания. В дальнейшем в крови образуются иммуноглобулины класса G. Они отвечают за наличие постоянного иммунитета против коклюша и паракоклюша. Обнаружение таких антител происходит методом серологического анализа.

Хотя коклюш и паракоклюш относятся к ряду детских заболеваний, каждому человеку необходимо знать о том, как именно протекает данная болезнь, какие симптомы имеет и какие анализы нужно сдавать для выявления опасной бактерии.

Нет гарантии того, что даже перенесший заболевание и привитый человек не сможет во второй раз заболеть коклюшем или паракоклюшем. Поэтому очень важно обладать необходимыми знаниями об этой болезни.

Бондаренко Татьяна

Эксперт проекта OPnevmonii.ru